Coloranti per batteriologia
Gram Stain KIT
Soluzioni coloranti, fissanti e decoloranti per la classificazione batterica secondo la colorazione di Gram.
- Codice
- LC-4600
- Categoria
- Coloranti per batteriologia
- Formato
- 4 flaconi da 250 mL
- Conservazione
- da 15 a 30 °C
- Validità minima garantita
- 15 mesi
La procedura della colorazione di Gram differenzia i microrganismi in due gruppi: quelli che trattengono il colorante primario (Gram-positivi) e quelli che perdono il colorante primario, per la struttura della parete cellulare, e prendono il colore del colorante di contrasto (Gram-negativi).
Caratteristiche principali
Applicazioni
Differenziazione dei batteri Gram-positivi e Gram-negativi.
Settori
Coloranti.
Principio e uso
La procedura richiede quattro reagenti: colorante primario (Crystal Violet Solution), soluzione di iodio (Lugol), decolorante (Acetone Ethanol Decolorant) e colorante di contrasto (Safranin Solution).
Specifiche tecniche
| Solubilità | Senza residui |
|---|---|
| Aspetto | Liquido |
| Conservazione | da 15 a 30 °C |
Formula
Acetone Ethanol Decolorant
| Componente | g/L |
|---|---|
| Etanolo | 970 |
| Acetone | 30 |
Lugol
| Componente | g/L |
|---|---|
| Acqua | 990 |
| Iodio | 3,5 |
| Ioduro di potassio | 6,5 |
Oxalate Crystal Violet Solution
| Componente | g/L |
|---|---|
| Etanolo | 200 |
| Acqua | 787 |
| Ossalato di ammonio | 7,5 |
| Cristal violetto | 5,5 |
Safranin Solution
| Componente | g/L |
|---|---|
| Safranina | 4,5 |
| Acqua | 795,5 |
| Etanolo | 200 |
Istruzioni per l'uso
Preparare uno striscio e fissarlo al calore scaldandolo delicatamente sulla fiamma.
- Coprire lo striscio con Crystal Violet. Lasciare agire per 1 min.
- Eliminare l'eccesso sciacquando con acqua di rubinetto.
- Coprire con Lugol e lasciare agire per 1 min.
- Scolare e sciacquare con acqua di rubinetto.
- Decolorare con Acetone Ethanol Decolorant finché il decolorante di scarto non è incolore.
- Sciacquare con acqua di rubinetto.
- Colorare di contrasto con Safranin Solution per 1 min.
- Sciacquare con acqua di rubinetto e lasciare asciugare all'aria.
Esaminare con un obiettivo a immersione in olio.
La procedura si può modificare secondo le preferenze dell'utilizzatore, per ottenere un'intensità di colore più debole o più forte, cambiando i tempi di colorazione, di lavaggio, ecc.
Colture o strisci vecchi possono dare risultati atipici. Per questo si raccomandano colture di 18-24 ore o strisci recenti.
È molto importante controllare la fissazione al calore (pochi secondi): qualunque eccesso di calore può produrre risultati errati.
Un'acqua di rubinetto molto clorata può indebolire la colorazione di contrasto.
Controllo qualità
Prova microbiologica
| Microrganismo | Specifica |
|---|---|
| Batteri Gram-positivi | Colonie viola scuro |
| Batteri Gram-negativi | Colonie rosso-arancio |
Bibliografia
- Clark, G. (1981) "Staining Procedures", 4th ed, Williams & Wilkins.
- Bartholomew J.M., Mitwer, T. (1952), Bacteriol. Rev., 16, 1-29.
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