Letheen Agar Modified

Descrizione

Nel 1965 la metodologia fu accettata dall'AOAC per i saggi antimicrobici e ne estese l'uso a tutti i tensioattivi cationici (detergenti). Il terreno TAT (Tryptone-Azolectin-Polysorbate) del Newburger Cosmetic Analysis Manual (2ª ed., 1977) ha una composizione simile e usa la formulazione dell'AOAC. Nel 1978 la FDA (Bacteriological Analytical Manual, 5ª ed., 1978) lo adottò come terreno presuntivo primario e di arricchimento per tutti gli esami microbiologici dei cosmetici.

La formulazione attuale compare nell'8ª edizione (1998) del BAM; le modifiche principali sono l'aggiunta di cloruro di sodio, che fornisce una pressione osmotica adeguata, e una maggiore quantità di peptoni e di estratti di tessuti per favorire una buona crescita. Queste modifiche trasformano il terreno in un terreno multiuso molto ricco, adatto a neutralizzare quasi tutti i conservanti presenti nei campioni in esame.

Tecnica

Per l'uso, il contenuto del flacone va versato in piastre. Il terreno di coltura va fuso secondo le istruzioni del produttore, a bagnomaria (100 °C) o nel forno a microonde. Prima di fondere qualsiasi terreno, allentare il tappo a vite del contenitore per evitare che si rompa. Il terreno va fuso una sola volta e poi usato. I terreni con agar non vanno fusi più volte, perché le loro caratteristiche cambiano a ogni nuova fusione. Il surriscaldamento va evitato quanto il riscaldamento prolungato, soprattutto per i terreni a pH acido o alcalino.

Raccogliere, diluire e preparare campioni e volumi secondo le specifiche, le direttive, le norme ufficiali e/o i risultati attesi.

Seminare le piastre per striscio o con il metodo a spirale. Incubare le piastre non capovolte, in aerobiosi, a 35 ± 2 °C per 24-48 h.

(A seconda del campione, delle specifiche, ecc., possono essere necessari tempi di incubazione più lunghi di quelli indicati sopra o temperature di incubazione diverse.)

Ogni laboratorio deve valutare i risultati secondo le proprie specifiche.

Calcolare la carica microbica totale per mL di campione moltiplicando il numero medio di colonie per piastra per l'inverso del fattore di diluizione, se è stato seminato un campione diluito. Riportare i risultati come unità formanti colonia (UFC) per mL o per g, insieme al tempo e alla temperatura di incubazione.

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Fusione - piastre per inclusione - inoculo: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ UFC (selettività).

Controllo microbiologico secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018.

Aerobiosi. Incubazione a 32,5 ± 2,5 °C, lettura dopo 24-72 ore.

Controllo di sterilità

Incubazione 24 h a 30-35 °C e 72 h a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

Incubazione 7 giorni a 30-35 °C: NESSUNA CRESCITA.

• ASTM Standard E 640-78 (1991) Test Method for the preservatives in water-containing cosmetics. Philadelphia. PA. USA.
• ATLAS, R.M., L.C. PARKS (1993) Handbook of Microbiological Media. CRC Press, Inc. London.
• FDA (Food and Drug Administration) (1998) Bacteriological Analytical Manual. 8th ed. Rev. A. AOAC International. Gaithersburg. MD. USA.
• HORWITZ, W. (2000) Official Methods of Analysis. 17th ed. AOAC International. Gaithersburg. MD. USA.
• ISO 11133:2014/Amd 1:2018. Microbiology of food, animal feed and water. Preparation, production, storage and performance testing of culture media.
• LUCAS, I.P. (1977) Microbiological Examination of Cosmetics. Newburger's Manual of Cosmetic Analysis AOAC. Washington. USA.
• US PHARMACOPOEIA (2002) <61> Microbial Limit Tests. 25th ed. US Pharmacopeial Convention. Rockville. MD. USA.
• WEBER, G.R. & L.A. BLACK (1948) Relative efficiency of quaternary inhibitors. Soap and Sanit. Chem. 24:134-139.