Letheen Broth Modified

Descrizione

Nel 1965 la metodologia fu accettata dall'AOAC per i saggi antimicrobici e ne estese l'uso a tutti i tensioattivi cationici (detergenti). Il terreno TAT (Tryptone-Azolectin-Polysorbate) del Newburger Cosmetic Analysis Manual (2ª ed., 1977) ha una composizione simile e usa la formulazione dell'AOAC. Nel 1978 la FDA (Bacteriological Analytical Manual, 5ª edizione, 1978) lo adottò come terreno presuntivo primario e di arricchimento per tutti gli esami microbiologici dei cosmetici.

La formulazione attuale compare nell'8ª edizione (1998) del BAM; le modifiche principali sono l'aggiunta di cloruro di sodio, che fornisce una pressione osmotica adeguata, e una maggiore quantità di peptoni e di estratti di tessuti per favorire una buona crescita. Queste modifiche trasformano il terreno in un terreno multiuso molto ricco, adatto a neutralizzare quasi tutti i conservanti presenti nei campioni in esame.

Anche il comitato tecnico ISO per i cosmetici (ISO/TC 217) (2006) ha adottato la formulazione attuale come terreno di arricchimento alternativo prima dell'esame microbiologico, ma idealmente a questo scopo si dovrebbe usare Eugon LT100 Broth.

Tecnica

Raccogliere, diluire e preparare campioni e volumi secondo le specifiche, le direttive, le norme ufficiali e/o i risultati attesi. Se il contenitore originale è di grande volume, distribuire il terreno liquido in contenitori adatti.

Inoculare in modo asettico i flaconi/le provette con il campione preparato o con la sua diluizione.

Incubare le provette ben chiuse, in aerobiosi, a 30-35 °C per 24-48-72 h.

(I tempi di incubazione, la temperatura e i volumi di campione possono variare a seconda del campione, delle specifiche, ecc.)

Leggere l'aumento della torbidità come indicatore di crescita.

Questo terreno si può usare per inoculare un qualsiasi terreno secondario di conferma, per striscio o con il metodo a spirale; dopo un'incubazione adeguata, contare tutte le colonie comparse sulla superficie dell'agar secondario.

Ogni laboratorio deve valutare i risultati secondo le proprie specifiche.

Calcolare la carica microbica totale per mL di campione moltiplicando il numero medio di colonie per piastra per l'inverso del fattore di diluizione, se è stato seminato un campione diluito. Riportare i risultati come unità formanti colonia (UFC) per mL o per g, insieme ai terreni di arricchimento e secondari usati, al tempo e alla temperatura di incubazione.

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Inoculo: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività).

Metodologia analitica secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018; A2:2020.

Aerobiosi. Incubazione a 30-35 °C. Lettura a 24-48 h, fino a 72 h.

Controllo di sterilità

Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.

• ASTM Standard E 640-78 (1991) Test Method for the preservatives in water-containing cosmetics. Philadelphia. PA. USA.
• ATLAS, R.M., L.C. PARKS (1993) Handbook of Microbiological Media. CRC Press, Inc. London.
• FDA (Food and Drug Administration) (1998) Bacteriological Analytical Manual 8th ed. Rev. A. AOAC International. Gaithersburg. MD. USA.
• HORWITZ, W. (2000) Official Methods of Analysis. AOAC International. Gaithersburg. MD. USA.
• ISO 11133:2014/Amd 1:2018. Microbiology of food, animal feed and water. Preparation, production, storage and performance testing of culture media.
• ISO 16212 Standard (2017) Cosmetics - Microbiology - Enumeration of yeast and mould.
• ISO 21149 Standard (2017) Cosmetics - Microbiology - Enumeration and detection of aerobic mesophilic bacteria.
• ISO 21150 Standard (2015) Cosmetics - Microbiology - Detection of Escherichia coli.
• ISO 22717 Standard (2015) Cosmetics - Microbiology - Detection of Pseudomonas aeruginosa.
• ISO 22718 Standard (2015) Cosmetics - Microbiology - Detection of Staphylococcus aureus.
• LUCAS, I.P. (1977) Microbiological Examination of Cosmetics. Newburger's Manual of Cosmetic Analysis AOAC. Washington.
• US PHARMACOPOEIA (2002) <61> Microbial Limit Tests. 25th ed. US Pharmacopeial Convention. Rockville. MD. USA.
• WEBER, G.R. & L.A. BLACK (1948) Relative efficiency of quaternary inhibitors. Soap and Sanit. Chem. 24:134-139.