Terreni pronti all'uso
R2A Agar EP/USP
Terreno solido per la conta dei microrganismi eterotrofi nelle acque trattate secondo il metodo della farmacopea.
- Codice
- LC-4711
- Categoria
- Terreni pronti all'uso
- Formato
- 30 piastre da 55 mm per acque
- Controllo qualità ISO 17025
- Sì
- Conservazione
- da 2 a 25 °C
- Validità minima garantita
- 2 mesi
- Norme
- Farmacopea EuropeaUSP
- Disponibile anche
- Terreno disidratato, 1 formato (LC-1071)
R2A Agar fu proposto nel 1979 da Reasoner e Geldreich e qualche anno dopo fu accettato dall'APHA come terreno alternativo per la conta delle cellule stressate nell'acqua potabile trattata. Il terreno di coltura è stato adottato anche dalla Farmacopea Europea per il controllo dell'acqua purificata.
Caratteristiche principali
Applicazioni
Conta non selettiva degli aerobi.
Settori
Monitoraggio ambientale, farmaceutico e veterinario, acque.
Norme
Farmacopea Europea, USP.
Presentazione
30 piastre pronte da 55 mm per filtrazione con 9 ± 1 mL.
Descrizione e tecnica
Descrizione
L'uso di terreni ricchi di nutrienti come PCA o TSA permette la crescita della maggior parte dei microrganismi, ma non il recupero degli organismi stressati o resistenti al cloro. Usando un terreno povero di nutrienti come R2A, insieme a una temperatura più bassa e a un tempo di incubazione più lungo, è possibile indurre la rivitalizzazione di queste cellule danneggiate.
In R2A Agar la fonte di azoto è il peptone e l'estratto di lievito fornisce le vitamine e i fattori di crescita. La fonte di carbonio è il destrosio; il solfato di magnesio e il fosfato di potassio mantengono la pressione osmotica. L'amido è un detossificante e il piruvato di sodio aumenta il recupero delle cellule stressate. L'agar agisce da gelificante.
Tecnica
Il campione di acqua va analizzato il prima possibile. Se non è possibile analizzarlo entro le prime 6 ore, il campione va refrigerato, ma non per più di 30 ore.
Raccogliere, diluire e preparare campioni e volumi da filtrare secondo le specifiche, le direttive, le norme ufficiali e/o i risultati attesi.
Filtrare il campione su una membrana con pori da 0,45 µm e porla sulla superficie dell'agar.
Se si incuba a 35 °C, si raccomanda un periodo di incubazione di 3-5 giorni. Nella maggior parte dei casi è più efficace una temperatura di incubazione di 20-25 °C per 5-7 giorni. Le piastre vanno protette dalla disidratazione.
Dopo l'incubazione, contare tutte le colonie comparse sulla superficie della membrana.
Calcolare la carica microbica totale per mL di campione moltiplicando il numero medio di colonie per piastra per l'inverso del fattore di diluizione. Riportare i risultati come unità formanti colonia (UFC) per mL, insieme al tempo e alla temperatura di incubazione.
Presentazione
| Presentazione | 30 piastre pronte da 55 mm per filtrazione |
|---|---|
| Riempimento | 9 ± 1 mL |
| Confezione | 1 scatola con 5 buste di plastica da 6 piastre da 55 mm. |
Composizione
| Componente | g/L |
|---|---|
| Proteoso peptone | 0,500 |
| Idrolizzato di caseina (triptone) | 0,500 |
| Estratto di lievito | 0,500 |
| D(+) glucosio | 0,500 |
| Amido | 0,500 |
| Piruvato di sodio | 0,300 |
| Idrogenofosfato dipotassico | 0,300 |
| Solfato di magnesio (anidro) | 0,024 |
| Agar | 15,000 |
Controllo qualità
Controllo fisico-chimico
| Colore | Giallo pallido |
|---|---|
| pH | 7,2 ± 0,2 a 25 °C |
Controllo microbiologico
Prova di promozione della crescita secondo le monografie e i metodi di prova armonizzati delle farmacopee e ISO 11133:2014.
Filtrazione su membrana / intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ UFC per la selettività.
Aerobiosi. Incubazione a 30-35 °C per 24-48 h (batteri) e a 20-25 °C per 3-5 giorni (muffe e lieviti).
| Microrganismo | Crescita |
|---|---|
| Ps. aeruginosaATCC 9027, WDCM 00026 | Buona (≥ 70 %) |
| Bacillus subtilisATCC 6633, WDCM 00003 | Buona (≥ 70 %) |
| Escherichia coliATCC 8739, WDCM 00012 | Buona (≥ 70 %) |
| Aspergillus brasiliensisATCC 16404, WDCM 00053 | Buona (≥ 70 %) |
| Candida albicansATCC 10231, WDCM 00054 | Buona (≥ 70 %) |
| Staphylococcus aureusATCC 6538, WDCM 00032 | Buona (≥ 70 %) |
Controllo di sterilità
Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.
Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.
Bibliografia
- ATLAS, R.M. (1995) Handbook of Media for Environmental Microbiology. CRC Press. Boca Raton. Fla. USA.
- CLESCERI, L.S., A.E. GREENBERG and A.D. EATON (1998) Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 20th ed. APHA Washington D.C. USA.
- EATON, A.D., A.E. GREENBERG and L.S. CLESCERI (1995). Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 19th ed. APHA Washington D.C. USA.
- EUROPEAN PHARMACOPOEIA. 6th ed. Suppl 6.3 (2009) General Monographs. Water for injections. (pg. 4339) EDQM. Council of Europe. Strasbourg.
- GREENBERG, A.E., R.R. TRUSSELL and L.S. CLESCERI (1985). Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 16th ed. APHA-AWWA-WPCF. Washington D.C. USA.
- REASONER, D.J. and E.E. GELDREICH (1979) A new Medium for the enumeration and subculture of bacteria from potable water. Abstracts of Annual Meeting. ASM 79th Meeting. Paper #N7.
- Van SOETSBERGER, A.A. and C.H. LEE (1969) Pour plates or streak plates? Appl. Microbiol. 18:1092-1094.
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