Sabouraud Dextrose Agar + Chloramphenicol EP/USP/ISO

La formula si basa sulla Farmacopea Europea. Il destrosio è il carboidrato fermentabile che fornisce carbonio ed energia. La miscela di peptoni fornisce azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'agar batteriologico è l'agente solidificante. L'elevata concentrazione di destrosio e il pH acido rendono questo terreno selettivo per i funghi.

Questo terreno è una modifica del Dextrose Agar descritto da Sabouraud, con l'aggiunta di cloramfenicolo, che inibisce la grande maggioranza dei contaminanti batterici. Il cloramfenicolo è un antibiotico usato per isolare i funghi patogeni da materiale molto contaminato, perché inibisce la maggior parte dei batteri contaminanti. È un antibiotico raccomandato per l'uso nei terreni per la sua stabilità al calore e il suo ampio spettro batterico.

Questo terreno ha una concentrazione di cloramfenicolo più bassa del terreno con lo stesso nome (LC-1090), che lo rende meno inibente per i batteri contaminanti.

Sabouraud Dextrose Agar + Chloramphenicol è raccomandato dalla Farmacopea Europea quando si prevede che la conta totale di lieviti e muffe (TYMC) superi il criterio di accettazione a causa della crescita batterica.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 65 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Distribuire e sterilizzare in autoclave a 118-121 °C per 15 minuti. EVITARE DI SURRISCALDARE.

Secondo la Farmacopea Europea

Per l'esame della TYMC nei prodotti secondo la Farmacopea Europea.

Filtrazione su membrana:

1. Preparare il campione.
2. Trasferire la quantità adatta di campione su una membrana filtrante.
3. Porre la membrana sulla superficie di Sabouraud Dextrose Agar.
4. Incubare la piastra di Sabouraud Dextrose Agar a 20-25 °C per 5-7 giorni.

Metodi di conta su piastra:

1. Preparare il campione.
2. Inoculare le piastre di Sabouraud Dextrose Agar con il metodo per inclusione o con il metodo per spatolamento in superficie.
3. Incubare le piastre di Sabouraud Dextrose Agar a 20-25 °C per 5-7 giorni.
4. Selezionare le piastre che corrispondono a una data diluizione e che mostrano il numero più alto di colonie inferiore a 50.

Per la prova di Candida albicans nei prodotti secondo la Farmacopea Europea:

1. Preparare il prodotto da esaminare e usare 10 mL o la quantità corrispondente ad almeno 1 g o 1 mL per inoculare 100 mL di Sabouraud Dextrose Broth.
2. Incubare a 30-35 °C per 3-5 giorni.
3. Trapiantare su una piastra di Sabouraud Dextrose Agar.
4. Incubare a 30-35 °C per 24-48 ore.
5. La crescita di colonie bianche può indicare la presenza di C. albicans. Confermare con prove di identificazione.
6. Il prodotto è conforme alla prova se queste colonie non sono presenti o se le prove di conferma sono negative.

Secondo ISO 16212

Per la conta di lieviti e muffe secondo ISO 16212:

1. Preparare la sospensione iniziale da un campione di almeno 1 g o 1 mL del prodotto. Se necessario, dalla sospensione iniziale si possono preparare altre diluizioni seriali (per esempio diluizione 1:10) con lo stesso diluente (secondo il livello di contaminazione atteso del prodotto).
2. La conta di lieviti e muffe si può eseguire con i metodi di conta su piastra e con il metodo di filtrazione su membrana.
3. Inoculare la sospensione iniziale e/o la diluizione del campione su piastre di Sabouraud Dextrose Agar + Chloramphenicol.
4. Incubare a 25 ± 2,5 °C per 3-5 giorni.
5. Dopo l'incubazione, contare le colonie.

• Sabouraud R. 1892. Ann. Dermatol. Syphilol. 3:1061.
• Jarett, L., and A.C. Sonnenwirth (ed) 1980. Gradwohl's clinical laboratory methods and diagnosis, 8th ed. CV Mosby.
• Curry, A. S., J. G. Graf, and G. N. McEwen, Jr. (ed) 1993. CTFA Microbiology Guidelines. The Cosmetic, Toiletry, and Fragrance Association, Washington, D.C.
• European Pharmacopoeia 9.3
• ISO 16212:2017 Cosmetics. Microbiology. Enumeration of yeast and molds.