Triple Sugar Iron Agar (TSI) ISO

Il peptone e l'estratto di manzo forniscono azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'estratto di lievito è fonte di vitamine, in particolare del gruppo B. I tre carboidrati (glucosio, saccarosio e lattosio) sono i carboidrati fermentabili che forniscono carbonio ed energia. Quando questi vengono fermentati, la produzione di acido è indicata dall'indicatore rosso fenolo: il colore vira al giallo per la produzione di acido e al rosso per l'alcalinizzazione. Il tiosolfato di sodio è ridotto ad acido solfidrico, che reagisce con il sale di ferro formando il solfuro di ferro nero. Il citrato ferrico ammonico è un indicatore di H2S. Il cloruro di sodio fornisce gli elettroliti essenziali per il trasporto e l'equilibrio osmotico. L'agar batteriologico è l'agente solidificante.

La concentrazione di glucosio nel terreno è un decimo di quella del lattosio o del saccarosio, per facilitare la rilevazione dei microrganismi che fermentano solo il glucosio. La fermentazione del glucosio produce una piccola quantità di acido nel becco di clarino della provetta, che si ossida rapidamente, e il terreno resta rosso o torna a un pH alcalino. Invece la stessa reazione acida nel fondo della provetta mantiene il pH acido (giallo), per la minore tensione di ossigeno.

Quando tutto il glucosio è consumato, i microrganismi capaci di fermentare il lattosio o il glucosio cominceranno a utilizzarli. Per favorire il libero scambio d'aria nel becco della provetta, il tappo va chiuso senza stringere.

L'aggiunta di saccarosio all'1 % in TSI Agar permette di differenziare Proteus da Salmonella. La fermentazione del saccarosio da parte di Proteus fa virare il colore dell'indicatore rosso fenolo nel becco dal rosso al giallo. I membri del genere Salmonella, destrosio-positivi e lattosio-negativi, causano tutti un arrossamento del becco e acidificano il fondo delle provette di agar.

Preparazione

Sospendere 64,6 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Distribuire in provette e sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti. Lasciar raffreddare in posizione inclinata, per ottenere un fondo di 1,5-2,0 cm di profondità.

Istruzioni per l'uso

1. Seminare per striscio la superficie del becco e per infissione il fondo.
2. Incubare a 37 °C per 24 ± 3 h secondo ISO 6579 e a 36 ± 2 °C per 24 ± 3 h secondo ISO 19250.
3. Interpretare le variazioni del terreno come segue:

Fondo:

• Giallo: glucosio positivo.
• Rosso o invariato: glucosio negativo.
• Nero: formazione di acido solfidrico.
• Bolle o fratture: formazione di gas dal glucosio.

Superficie del becco:

• Giallo: lattosio e/o saccarosio positivo.
• Rosso o invariato: lattosio e/o saccarosio negativo.

• ISO 6579 Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method for the detection of Salmonella spp.
• Standard Methods for the Examination of Dairy Products. APHA, 1972.
• Food and Drug Administration. Bacteriological Analytical Manual, 1976.
• Vanderzant, C. and D.F. Splittstoesser (ed) 1992. Compendium of methods for the microbiological examination of foods, 3rd ed. American Public Health Association, Washington D.C.
• European Pharmacopoeia. 4th Edition. 2002.
• ISO 19250 Water quality - Detection of Salmonella spp.