Nitrate Broth

Tecnica

Inoculare 2-3 provette di brodo con un'ansata di coltura pura e incubare a 37 ± 1 °C, con lettura dopo 18-24 h e fino a 72 h. La lettura si esegue dopo l'incubazione (18-24 h), aggiungendo qualche goccia di ciascun reattivo (Nitrate A e B) o, meglio, la loro miscela in parti uguali. Il rosso ciliegia si considera un segnale positivo. L'assenza di colore è un segnale presuntivo di negatività. La verifica si esegue aggiungendo un po' di polvere di zinco: se compare un colore rosso, la prova è negativa; altrimenti (nessun cambiamento di colore) la prova è positiva.

L'instabilità del colore rosso, che vira facilmente e rapidamente al rosso bruno, è dovuta a un eccesso di nitrito e non ha altri effetti sulla prova.

Le colture negative dopo 24 ore vanno ripetute dopo 48 e 72 ore in altre provette, prima di scartarle come negative.

Nei ceppi non fermentanti la produzione di gas è di solito un segnale di denitrificazione. Con i ceppi fermentanti può trattarsi solo di CO₂. In ogni caso è consigliabile inoculare con le campanelle di Durham.

Le prove di riduzione del nitrato vanno sempre eseguite con provette di controllo non inoculate, perché la contaminazione del materiale con ossido nitroso o nitrito basta a dare reazioni falsamente positive.

Una campanella di fermentazione di Durham capovolta nel terreno in provetta serve a intrappolare l'azoto gassoso prodotto dalla denitrificazione.

Durante il trasporto possono formarsi bolle d'aria nella campanella di Durham. Se prima dell'inoculo ci sono bolle d'aria nella campanella di Durham, capovolgere la provetta finché l'aria non esce dalla campanella. Se le bolle d'aria non si eliminano prima dell'inoculo, il risultato può essere letto come una falsa reazione positiva di produzione di gas.

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Inoculare una coltura pura.

Aerobiosi. Incubazione a 35 ± 2 °C, lettura dopo 18-24 ore.

Controllo di sterilità

Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.

• ATLAS, R.M., L.C. PARKS (1993) Handbook of Microbiological Media. CRC Press, Inc. London.
• BLAZEVIC, D.J. (1972) Laboratory Procedures in Diagnostic Microbiology. Telstar Productions Inc., St. Paul, Minn. pg 109.
• BLAZEVIC, D.J. & EDERER G.M. (1975) Principles of Biochemical Tests in Diagnostics Microbiology. John Wiley Sons N.Y.
• DOWNES, F.P. & K. ITO (2001) Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 4th ed. APHA. Washington.
• FDA (Food and Drug Administration) (1998) Bacteriological Analytical Manual. 8th ed. Rev. A. AOAC International Inc. Gaithersburg. MD.
• FORBES, B.A., D.F. SAMM & A.S. WEISSFELD (1998) Bailey & Scott's Diagnostics Microbiology. 10th ed. Mosby. St. Louis.
• GRIESS, P. (1879) Liebereinige Azoverbindungen. Ber. Deutsch. Chem. Gesellsch. 12:426-427.
• McFADDIN, J.F. (2000) Biochemical Tests for identification of medical bacteria. 3rd ed. Lippincott William and Wilkins. Philadelphia.
• WALLACE, G.I. & S.L. NEAVE (1927) The nitrite test as applied to bacterial cultures. J. Bact. 14:377-384.