Terreni disidratati
OF Basal Medium (Hugh And Leifson)
Per l'identificazione dei bacilli non fermentanti.
- Codice
- LC-1500
- Categoria
- Terreni disidratati
- Formato
- 500 g
- Conservazione
- da 2 a 25 °C
- Validità minima garantita
- 15 mesi
OF Basal Medium (Hugh And Leifson) è un terreno semisolido, preparato secondo la formula di Hugh e Leifson, che si usa per determinare il metabolismo (ossidazione, fermentazione) dei batteri Gram-negativi. È utile per Pseudomonas, Salmonella, Shigella e Alcaligenes.
Caratteristiche principali
Applicazioni
Differenziazione dei batteri Gram-negativi non fermentanti.
Settori
Prove di sensibilità agli antimicrobici.
Preparazione
9,8 g in un litro di acqua distillata; scaldare fino a dissoluzione, sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti.
Principio e uso
Il peptone di caseina fornisce azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. Il blu di bromotimolo è l'indicatore di pH. Il cloruro di sodio fornisce gli elettroliti essenziali per il trasporto e l'equilibrio osmotico. Il fosfato dipotassico agisce da sistema tampone. L'agar batteriologico è l'agente solidificante.
Specifiche tecniche
| Solubilità | Senza residui |
|---|---|
| Aspetto | Polvere fine |
| Colore del terreno disidratato | Beige con una sfumatura verdastra |
| Colore del terreno preparato | Verde bluastro |
| pH finale (25 °C) | 7,1 ± 0,2 |
| Quantità per litro | 9,8 g |
| Conservazione | da 2 a 25 °C |
Formula
| Componente | g/L |
|---|---|
| Blu di bromotimolo | 0,03 |
| Agar batteriologico | 2,5 |
| Peptone di caseina | 2 |
| Fosfato dipotassico | 0,3 |
| Cloruro di sodio | 5 |
Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.
Preparazione e uso
Preparazione
Sospendere 9,8 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Scaldare agitando spesso fino a dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti. Aggiungere a 100 mL di terreno liquido 10 mL di una soluzione di glucosio (o di un altro zucchero adatto) al 10 %, sterilizzata per filtrazione. Mescolare e distribuire in asepsi 5 mL per provetta. Se si preferisce, aggiungere 1,0 grammi di carboidrato direttamente a 100 mL di terreno e sterilizzare in autoclave a 118 °C per 10 minuti, per evitare la degradazione dello zucchero.
Istruzioni per l'uso
- Inoculare per infissione 2 provette fresche con una coltura fresca del microrganismo in esame. Se il terreno è stato preparato e conservato, rifonderlo a bagnomaria per eliminare i gas disciolti.
- Dopo l'inoculo, aggiungere a una delle provette uno strato di olio di paraffina da 4 a 5 mm. Non si raccomanda di usare olio minerale.
- Incubare entrambe le provette a 35 °C per 48 ore o più, fino a 7 giorni, con i tappi allentati.
- Per facilitare l'identificazione dei bacilli Gram-negativi non fermentanti, usare anche Indole Nitrate Medium (LC-1504).
Risultati:
- Fermentazione: colore giallo in entrambe le provette, con o senza gas.
- Ossidazione: colore giallo solo nella provetta senza olio.
- Nessuna ossidazione/fermentazione: nessuna variazione del colore delle provette. I carboidrati non sono stati fermentati né ossidati. Microrganismi inerti, per esempio Alcaligenes faecalis.
Controllo qualità
Prova microbiologica
Condizioni di incubazione: 37 ± 1 °C / 48-72 h.
- K = alcalino, verde (senza variazione)
- A = acido, giallo
- G = gas, talvolta percettibile
| Microrganismo | Specifica | Reazione caratteristica senza zucchero | Reazione caratteristica con glucosio |
|---|---|---|---|
| Shigella flexneriATCC 12022 | Crescita buona | Aperta: K, chiusa: K | Aperta: A, chiusa: A |
| Salmonella enteritidisATCC 13076 | Crescita buona | Aperta: K, chiusa: K | Aperta: AG, chiusa: AG |
| Escherichia coliATCC 25922 | Crescita buona | Aperta: K, chiusa: K | Aperta: AG, chiusa: AG |
| Pseudomonas aeruginosaATCC 27853 | Crescita buona | Aperta: K, chiusa: K | Aperta: K, chiusa: K |
| Alcaligenes faecalisATCC 8750 | Crescita buona | Aperta: K, chiusa: K | Aperta: K, chiusa: K |
Bibliografia
- Hugh, R. and Leifson, E. J. Bact. 66:24-26. 1953.
- Lisenko J. Gen. Microbiol., 35:379, 1961.
- Edwards and Ewing Identification of Enterobacteriaceae. Burgess Publ. Co. Minneapolis, Minn., 1972.
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