Indole Nitrite Medium (Trypticasein Nitrate Medium)

Il peptone di caseina fornisce azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. Il nitrato di potassio è il substrato per determinare la riduzione del nitrato. Il destrosio è il carboidrato fermentabile che fornisce carbonio ed energia.

Questo terreno si usa per identificare i bacilli Gram-negativi con 2 prove: una per la produzione di indolo e l'altra per la riduzione del nitrato. Indole Nitrite Medium si può usare per le prove del nitrito con i membri della famiglia delle Enterobacteriaceae, ma non è raccomandato per la prova dell'indolo con questi microrganismi, perché riducono il nitrato a nitrito e così impediscono la rilevazione dell'indolo.

Preparazione

Sospendere 25 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Per le prove di motilità e di rilevazione del gas, aggiungere 2 grammi di agar. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Distribuire in normali provette, riempiendole a metà, e sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti. Se il terreno preparato è semisolido, lasciarlo solidificare nelle provette in posizione verticale. Usare il terreno entro i primi 2 giorni dalla preparazione. Se lo si conserva più a lungo, scaldarlo a bagnomaria fino all'ebollizione per rigenerarlo.

Istruzioni per l'uso

La prova dell'indolo va eseguita dopo 24-48 ore di incubazione (o dopo una buona crescita batterica) alla temperatura di 35 ± 2 °C, aggiungendo qualche goccia di Kovac's Reagent (LC-5205). Una prova positiva è indicata dalla formazione di un colore da rosa a rosso nello strato del reagente dopo alcuni minuti.

Per studiare la riduzione dei nitrati, usare 3 provette separate: un controllo positivo (Escherichia coli), un controllo negativo (Acetobacter calcoaceticus) e una terza provetta di confronto:

1. Inoculare abbondantemente ogni provetta per infissione.
2. Incubare a 35 °C per 8, 12 e 24 ore.
3. Aggiungere qualche goccia di Griess reagent.
4. La formazione di un colore rosso in 1-2 minuti indica la riduzione dei nitrati a nitriti (prova positiva).
5. Se non compare alcun colore, aggiungere alle provette un pizzico di polvere di zinco (priva di nitrati e nitriti).
6. Osservare se compare il colore rosso o se il terreno resta incolore.

1. Se non c'è riduzione del nitrato, lo zinco sarà ridotto a nitrito e formerà un colore rosso quando reagisce con il Griess reagent. Il microrganismo esaminato è negativo (assenza di nitrati).
2. Se non compare alcun colore, significa che il microrganismo ha ridotto a nitrito il nitrato presente nel terreno di coltura, portando forse la reazione fino all'azoto gassoso. Il microrganismo esaminato è positivo (presenza di nitrati).

• Finegold, S.M., Sutter, V.L.; Ahebery, H.R.; Rosenblatt, J.E.: Isolation of Anaerobic Bacteria. Man. Clin. Micro. Biol. 2nd ed. 1974. 365:375.
• Finegold, S.M.; Rosenblatt, J.E.: Practical Aspects of Anaerobic Sepsis Medicine. 1973. 52(4), 311:322.