Terreni cromogenici
TBX Chromogenic Agar (Tryptone Bile X-Glucuronide) ISO
Terreno selettivo per la rilevazione e la conta di Escherichia coli negli alimenti.
- Codice
- LC-1151
- Categoria
- Terreni cromogenici
- Formato
- 500 g
- Conservazione
- da 2 a 25 °C
- Validità minima garantita
- 12 mesi
- Norme
- ISO 11133ISO 16649
- Disponibile anche
- Terreno pronto all'uso, 3 formati (LC-982)
TBX Chromogenic Agar (Tryptone Bile X-Glucuronide) si basa sul terreno Tryptone Bile Salts Agar, usato per rilevare e contare E. coli negli alimenti, con l'aggiunta di un agente cromogeno, X-beta-D-glucuronide, per rilevare la presenza dell'enzima glucuronidasi, altamente specifico per E. coli.
Caratteristiche principali
Applicazioni
Rilevazione e conta selettiva di Escherichia coli.
Settori
Alimenti.
Norme
ISO 11133, ISO 16649.
Preparazione
36,6 g in un litro di acqua distillata; far bollire per un minuto, sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti.
Principio e uso
In TBX Agar il cromoforo liberato è colorato e le colonie bersaglio si identificano facilmente. E. coli assorbe l'agente cromogeno X-beta-D-glucuronide e l'attività dell'enzima glucuronidasi intracellulare rompe il legame tra il cromoforo e il glucuronide. Il cromoforo liberato è colorato e si accumula all'interno delle cellule, colorando di blu-verde le colonie di E. coli.
Il peptone di caseina fornisce azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. I sali biliari sono inibitori degli altri microrganismi Gram-positivi e sopprimono i batteri coliformi. L'agar batteriologico è l'agente solidificante.
La norma ISO 16649 specifica un metodo orizzontale per la conta di E. coli beta-glucuronidasi-positivi nei prodotti destinati al consumo umano o all'alimentazione animale.
Le colonie di E. coli beta-glucuronidasi-negativi sono incolori, per esempio E. coli O157:H7. Le temperature elevate (44 °C) inibiscono la crescita di E. coli O157:H7.
Specifiche tecniche
| Solubilità | Senza residui |
|---|---|
| Aspetto | Polvere fine |
| Colore del terreno disidratato | Beige |
| Colore del terreno preparato | Ambra, leggermente opalescente |
| pH finale (25 °C) | 7,2 ± 0,2 |
| Quantità per litro | 36,6 g |
| Conservazione | da 2 a 25 °C |
Formula
| Componente | g/L |
|---|---|
| Digerito enzimatico di caseina | 20 |
| Agar batteriologico | 15 |
| Sali biliari n. 3 | 1,5 |
| Acido 5-bromo-4-cloro-3-indolil-beta-D-glucuronico | 0,075 |
Preparazione e uso
Preparazione
Sospendere 36,6 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti. Raffreddare a 45-50 °C, mescolare bene e distribuire in piastre.
Secondo ISO 16649
Conta di Escherichia coli beta-glucuronidasi-positivi secondo ISO 16649:
- Inoculare TBX agar con il metodo per inclusione, con la semina in superficie oppure con il metodo di filtrazione su membrana.
- Il metodo di filtrazione su membrana e la conta con la tecnica del numero più probabile richiedono una fase preliminare di rivitalizzazione in Minerals Modified Glutamate Agar o Broth, MMGA o MMGB (LC-1365).
- Incubare le piastre di TBX agar per 21 ore alla temperatura di 44 °C.
- Calcolare il numero di colonie di Escherichia coli beta-glucuronidasi-positivi dal numero di colonie blu tipiche.
Controllo qualità
Secondo ISO 11133
Condizioni di incubazione: 44 ± 1 °C / 21 ± 3 h.
Condizioni di inoculo: produttività quantitativa (100 UFC, minimo 50 UFC) / produttività qualitativa (10³-10⁴ UFC) / selettività (10⁴-10⁶ UFC) / specificità (10³-10⁴ UFC).
Terreno di riferimento: TBX.
| Microrganismo | Specifica | Reazione caratteristica |
|---|---|---|
| Enterococcus faecalisATCC 19433 | Inibizione totale (0) | |
| Escherichia coliATCC 25922 | Crescita buona (2), > 50 % | Colonie blu |
| Pseudomonas aeruginosaATCC 27853 | Colonie da bianche a beige-verdi | |
| Enterococcus faecalisATCC 29212 | Inibizione totale (0) | |
| Citrobacter freundiiATCC 43864 | Colonie da bianche a beige-verdi | |
| Escherichia coliATCC 8739 | Crescita buona (2), > 50 % | Colonie blu |
| Escherichia coliCECT 9153 | Crescita buona (2), > 50 % | Colonie blu |
Bibliografia
- International standard ISO 16649: Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method for the enumeration of presumptive beta-glucuronidase-positive.
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