Minerals Modified Glutamate Broth (MMBG) ISO

Rispetto ad altri terreni, questo brodo è migliore perché dà meno risultati falsi positivi. Il glutammato di sodio e il formiato di sodio sono la base del terreno per la conta dei microrganismi coliformi nelle acque. Il lattosio è la fonte di carboidrati. L'aggiunta di vitamine, aminoacidi e solfato di magnesio eptaidrato aumenta la fermentazione, mentre l'aggiunta di citrato ferrico ammonico permette di aumentare la produzione di gas. Il porpora di bromocresolo è un indicatore di pH.

Preparazione

Sospendere 17,7 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Aggiungere 2,5 grammi di cloruro di ammonio. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Distribuire in contenitori adatti e sterilizzare in autoclave a 116 °C per 10 minuti.

Secondo ISO 16649

Conta di Escherichia coli beta-glucuronidasi-positivi secondo ISO 16649:

1. Inoculare tre provette di terreno a concentrazione singola e tre provette di terreno a concentrazione doppia.
2. I volumi maggiori di campione (10 mL) si aggiungono a volumi uguali di terreno a concentrazione doppia, mentre i volumi da 1 mL (o le loro diluizioni) si aggiungono a 5 mL di terreno a concentrazione singola.
3. Incubare le provette a 37 ± 1 °C ed esaminarle dopo 24 ± 2 ore per la produzione di acido (fermentazione del lattosio).
4. Ogni provetta di terreno di arricchimento selettivo che mostra produzione di acido (colore giallo) si trapianta su TBX Chromogenic Agar (LC-1151).
5. Incubare le piastre di TBX a 44 ± 1 °C per 22 ± 2 ore.
6. La presenza di colonie blu caratteristiche su TBX indica la presenza di Escherichia coli nella provetta di MMGB di origine.

I ceppi di Escherichia coli che non crescono a 44 °C e, in particolare, quelli beta-glucuronide negativi, come Escherichia coli O157:H7, non vengono rilevati.

• ISO 16649-3 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the enumeration of beta-glucuronidase-positive Escherichia coli - Part 3: Most probable number technique using 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-beta-D-glucuronide.
• Departments of the Environment, Health & Social Security, and P.H.L.S. 1982. The bacteriological examination of drinking water supplies. Report on public Health and Medical Subjects No. 71., H.M.S.O., London, England.