Accessori per PCR
Uracil-DNA Glycosylase (UDG)
Enzima ricombinante per prevenire le contaminazioni da carry-over nella PCR con dUTP
- Codice
- M3096
- Categoria
- Accessori per PCR
- Formati
- 2 formati
- Produttore
Uracil-DNA glicosilasi ricombinante di E. coli (26 kDa) che rimuove l'uracile dal DNA a singolo e doppio filamento. Se in tutte le PCR del laboratorio il dTTP viene sostituito con dUTP, un breve trattamento della nuova reazione con UDG elimina gli ampliconi contaminanti delle corse precedenti prima dell'amplificazione. L'enzima si inattiva a 95 °C e non agisce su oligonucleotidi di 6 basi o meno.
Caratteristiche principali
1 unità per reazione, 10 minuti a 15-25 °C prima della PCR, degrada gli ampliconi contenenti uracile.
Un'incubazione di 10 minuti a 95 °C inattiva l'enzima.
Non rimuove l'uracile da oligomeri di 6 basi o meno.
I prodotti con dU servono come bersagli di ibridazione e stampi di sequenziamento e si clonano in ospiti privi di UNG.
Applicazioni
- Prevenzione delle contaminazioni da carry-over in PCR
- Decontaminazione di reazioni allestite con dUTP
- Rimozione dell'uracile da DNA a singolo e doppio filamento
Specifiche tecniche
| Concentrazione | 10 U/µL |
|---|---|
| Origine | E. coli, ricombinante |
| Definizione di unità | 1 U rilascia 60 pmol di uracile al minuto da DNA a doppio filamento contenente uracile |
| Tampone di conservazione | 20 mM Tris-HCl pH 8,0, 50 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 50% glicerolo |
| Dosaggio | 1 U per reazione, 10 minuti a 15-25 °C prima della PCR |
| Requisiti | dUTP (200-600 µM) al posto del dTTP; con 500-600 µM di dUTP aumentare il MgCl2 di 2,5 mM |
| Inattivazione | 95 °C per 10 minuti |
| Conservazione | -20 °C; prodotti di PCR a +2/+8 °C per poche ore o a -20 °C per periodi lunghi |
| Spedizione | Su ghiaccio |
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