Yeast Extract Agar (YEA) ISO

Tecnica

Con un campione di acqua prelevato secondo le norme ISO 5667-2 e 5667-3, preparare una serie di diluizioni decimali (vedi la norma ISO 6887) con soluzione di Ringer 1/4 e trasferire aliquote in 2 serie parallele di piastre. Versare Tryptone Yeast Extract Agar sterilizzato e raffreddato a 45 °C e omogeneizzare con il campione (vedi la norma ISO 8199). Una volta solidificato, incubare una delle serie a 36 ± 2 °C per 48 ± 2 ore e l'altra a 22 °C per 3 giorni (72 ± 4 ore).

Per ottenere una buona conta, scegliere le piastre con 30-300 colonie. Esprimere i risultati come numero di unità formanti colonia per millilitro (UFC/mL) di campione per ogni temperatura di incubazione. Se con il campione non diluito non ci sono colonie, esprimere i risultati come "nessuna rilevata in un mL". Se nella diluizione più alta ci sono più di 300 colonie, esprimere i risultati come "> 300 UFC/mL".

LC-4022, provette

Fondere il terreno di coltura e versarlo in piastre sterili.

LC-4671 e LC-4672, flaconi

Fondere il terreno contenuto nei flaconi a bagnomaria (circa 100 °C) o nel forno a microonde, evitando di surriscaldarlo, prima di versarlo in piastre di Petri una volta raffreddato a temperatura ambiente.

LC-4703, piastre da 55 mm per filtrazione

Raccogliere, diluire e preparare campioni e volumi da filtrare secondo le specifiche, le direttive, le norme ufficiali e/o i risultati attesi.

Filtrare il campione su una membrana con pori da 0,45 µm e porla sulla superficie dell'agar.

Incubare le piastre non capovolte, in aerobiosi, a 36 ± 2 °C per 44 ± 4 h.

(A seconda del campione, delle specifiche o della normativa ISO, ecc., possono essere necessari tempi di incubazione più lunghi di quelli indicati sopra o temperature di incubazione diverse.)

Dopo l'incubazione, contare tutte le colonie sulla superficie della membrana.

Calcolare la carica microbica totale per mL di campione moltiplicando il numero medio di colonie per membrana per l'inverso del fattore di diluizione. Riportare i risultati come unità formanti colonia (UFC) per mL, insieme al tempo e alla temperatura di incubazione.

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Inoculo: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività).

Aerobiosi. Incubazione a 36 ± 2 °C, lettura a 44 ± 4 h.

LC-4022, LC-4671, LC-4672 e LC-4703: controllo microbiologico

LC-4022, LC-4671 e LC-4672: fondere il terreno - preparare le piastre - semina a spirale: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività).

LC-4022: terreno di riferimento YEA (convalidato). Controllo microbiologico secondo ISO 11133:2014.

LC-4703: filtrazione su membrana; intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività). Controllo microbiologico secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018.

Controllo di sterilità

Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.

• ISO Standard 6222 (1999) Water Quality - Enumeration of cultivable microorganisms. Colony count by inoculation in a nutrient agar culture.
• ISO Standard 5667-2 (1991) Water Quality - Sampling - Guidance on sampling techniques.
• ISO Standard 5667-3 (1996) Water Quality - Sampling - Guidance on the preservation and handling of samples.
• ISO Standard 6887 (1999) Microbiology - General - Guidance for the preparation of dilutions for microbiological examination.
• ISO Standard 8199 (1988) Water Quality - General guide to the enumeration of microorganisms by culture.
• ISO 11133:2014/Amd 1:2018. Microbiology of food, animal feed and water. Preparation, production, storage and performance testing of culture media.