Bryant-Burkey Broth Base (modified with resazurin)

Durante la mungitura vengono introdotte nel latte crudo piccole quantità di batteri a fermentazione butirrica. Quando il latte contaminato si usa per produrre formaggio, le salamoie vengono contaminate da spore di clostridi resistenti al calore. Durante la stagionatura dei formaggi semiduri e duri salati in salamoia (per esempio Gouda, Edam, Emmental, Gruyère e Parmigiano), i clostridi gasogeni del gonfiore tardivo fermentano il lattato in acido butirrico, acido acetico e gas (CO₂ e H₂). Il gas fa gonfiare il formaggio e causa un difetto noto come "gonfiore tardivo" o gonfiore butirrico.

Il terreno non contiene lattato, quindi lo si deve aggiungere quando si prepara il terreno. Il lattato di sodio è fermentato in anaerobiosi da C. tyrobutyricum e da altri clostridi che fermentano il lattato, che lo usano come fonte di carbonio ed energia, producendo idrogeno e CO₂. Il triptone e l'estratto di manzo forniscono azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'estratto di lievito è fonte di vitamine, in particolare del gruppo B, essenziali per la crescita batterica. L'acetato di sodio è l'agente selettivo che inibisce i batteri Gram-negativi e favorisce anche la crescita di C. tyrobutyricum. La L-cisteina è l'agente riducente e la resazurina è un indicatore di ossidazione, che vira dal rosa (aerobiosi) all'incolore (in anaerobiosi).

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 33 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Aggiungere 10 mL di lattato di sodio al 50 %. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Distribuire in provette da 10 mL e sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti.

Istruzioni per l'uso

1. Prima dell'uso, scaldare le provette e far bollire per 10 minuti per ripristinare le condizioni di anaerobiosi.
2. Lasciar raffreddare le provette alla temperatura di 75 °C. A questa temperatura le cellule vegetative muoiono e le spore si attivano.
3. Preparare diluizioni decimali del campione, inoculare in provette con 10 mL di terreno e lasciarle raffreddare a temperatura ambiente.
4. Versare 2 mL di paraffina fusa (60-65 °C) in ogni provetta, sterilizzata in precedenza in autoclave a 121 °C per 20 minuti.
5. Leggere i risultati dopo incubazione a 37 ± 2 °C per un massimo di 7 giorni, considerando positive le provette con crescita e produzione di gas.
6. Per la conta delle spore usare il metodo del numero più probabile (MPN).

• BRYANT M.P. and BURKEY L.A. 1956. The characteristics of lactate fermenting spore forming anaerobes from silage. J. Bact., 43-46.
• CERF O. et BERGERE J.L. 1968. Numeration des spores de Clostridium et son application au lait et aux produits laitiers. Numeration des différents groupes de Clostridium. Le lait, 48, 501-519.