Campylobacter Agar Base Blood Free (CCDA) ISO

Campylobacter è considerato la causa principale delle malattie enteriche. Campylobacter spp. può causare diarrea da lieve a grave, con feci molli e acquose, spesso seguite da diarrea con sangue. Questi patogeni sono molto infettivi e si trasmettono con alimenti o acqua contaminati.

Il terreno contiene solfato ferroso, piruvato di sodio e carbone per favorire la crescita delle specie di Campylobacter, poiché neutralizzano le forme tossiche dell'ossigeno (perossido di idrogeno), aumentando l'aerotolleranza e permettendo di isolare facilmente i ceppi sensibili all'ossigeno. Il desossicolato di sodio inibisce parzialmente o completamente i microrganismi Gram-positivi, i coliformi e Proteus. Il digerito enzimatico di tessuti animali e di caseina e l'estratto di manzo forniscono azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'agar batteriologico è l'agente solidificante. Il cefoperazone aumenta la selettività e inibisce la crescita dei bacilli enterici Gram-negativi e di alcune specie Gram-positive, mentre l'amfotericina B sopprime la crescita di lieviti e funghi. L'aumento della temperatura ha mostrato un aumento della selettività.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 22,75 grammi di terreno in 500 mL di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti. Raffreddare a 44-47 °C e aggiungere in condizioni asettiche una fiala di CCDA Supplement (Campylobacter Blood Free) (LC-6053). Omogeneizzare delicatamente e distribuire in piastre di Petri.

Secondo ISO 10272

Per la rilevazione e la conta di Campylobacter spp. secondo ISO 10272.

Per campioni con bassi numeri di campylobacter e basso livello di microflora di fondo e/o con campylobacter stressati:

1. Inoculare 10 g o 10 mL della porzione da analizzare in 90 mL del terreno di arricchimento Bolton Broth, in modo da ottenere una diluizione 1 a 10.
2. Incubare in atmosfera microaerobica a 37 °C per 4-6 ore, poi a 41,5 °C per 44 ± 4 ore.
3. Con la coltura ottenuta dal brodo di arricchimento (Bolton Broth), inoculare con un'ansa sterile il terreno CCDA e un altro terreno selettivo per Campylobacter.
4. Incubare le piastre di CCDA a 41,5 °C in atmosfera microaerobica per 44 ± 4 ore.
5. Confermare le colonie sospette.

Per campioni con bassi numeri di campylobacter e alto livello di microflora di fondo:

1. Inoculare 10 g o 10 mL della porzione da analizzare in 90 mL del terreno di arricchimento Preston Broth, in modo da ottenere una diluizione 1 a 10.
2. Incubare in atmosfera microaerobica a 41,5 °C per 14 ± 2 ore.
3. Con la coltura ottenuta dal brodo di arricchimento (Preston Broth), inoculare con un'ansa sterile il terreno CCDA.
4. Incubare le piastre di CCDA a 41,5 °C in atmosfera microaerobica per 44 ± 4 ore.
5. Confermare le colonie sospette.

Per campioni con alti numeri di campylobacter:

1. Inoculare su piastre di CCDA la porzione da analizzare, se il prodotto è liquido, o la sospensione iniziale nel caso degli altri prodotti (semina diretta).
2. Incubare le piastre a 41,5 °C in atmosfera microaerobica per 44 ± 4 ore.
3. Confermare le colonie sospette.
4. Il metodo della semina diretta è la procedura adatta per contare le colonie di Campylobacter.

Se sono disponibili poche informazioni sui campioni da analizzare, usare uno dei due metodi di arricchimento in parallelo con il metodo della semina diretta.

Le colonie tipiche sono grigiastre, spesso con un riflesso metallico, piatte e umide, con tendenza a espandersi.

Per confermare le colonie sospette, esaminare al microscopio la morfologia e la motilità delle colonie di Campylobacter, trapiantarle su un agar al sangue non selettivo e poi confermare con la rilevazione dell'attività ossidasica e con una prova di crescita in aerobiosi a 25 °C.

Il contenitore di questo prodotto può deformarsi a causa dell'elevata capacità di adsorbimento dell'ossigeno del carbone attivo contenuto nella formula.

• Bolton F.J., Hutchinson D.N. and Cioste D. (1984) Clin. Microbiol. 19,169-171
• Bolton E.J., Robertson L. (1982) J. Clin. Path. 35, 462-67
• ISO 10272-1:2017. Microbiology of the food chain - Horizontal method for detection and enumeration of Campylobacter spp. - Part 1: Detection method