CCDA Supplement (Campylobacter Blood free)

Tecnica

Raccogliere, diluire e preparare campioni e volumi secondo le specifiche, le direttive, le norme ufficiali e/o i risultati attesi.

Ricostituire la fiala con 5 mL di diluente sterile, preriscaldato a circa 37 °C, e aggiungerla a 500 mL di Campylobacter Agar Base Blood Free (CCDA) ISO (LC-1129) raffreddato a 50 °C prima di versarlo in piastre di Petri.

Una volta solidificato su una superficie piana, seminare le piastre per striscio o con il metodo a spirale.

Incubare le piastre in atmosfera microaerofila a 40-42 °C per 24-48 h.

(A seconda del campione o delle specifiche possono essere necessari tempi di incubazione più lunghi di quelli indicati sopra o temperature di incubazione diverse.)

Dopo l'incubazione, contare tutte le colonie comparse sulla superficie dell'agar.

L'isolamento presuntivo di Campylobacter spp. va confermato con ulteriori prove microbiologiche e biochimiche.

Ricostituire la fiala liofilizzata originale aggiungendo 5 mL di acqua distillata sterile.

Nota: ogni fiala è sufficiente per integrare 500 mL di Blood Free Campylobacter Agar Base.

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Ricostituire 1 fiala come indicato in Composizione; agitare e sciogliere completamente.

Aggiungere 1 fiala a 500 mL di terreno base. NON RISCALDARE dopo l'aggiunta del supplemento.

Microaerofilia. Incubazione a 35 ± 2 °C o a 42 ± 2 °C per 24-48 ore.

Distribuire in piastre da 90 mm il terreno completo, raffreddato a 50 °C.

Incubare secondo le istruzioni per il terreno completo indicate in Composizione.

Microaerofilia. Incubazione a 41,5 ± 1 °C; lettura a 44 ± 4 h.

Controllo di sterilità

Aggiungere 5 mL del campione a 100 mL di TSB e a 100 mL di Thioglycollate.

Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

• ASPINALL, S.T., D.R.A. WAREING, P.G. HAYWARD & D.N. HUTCHINSON (1993) Selective medium for thermophilic campylobacters including Campylobacter upsaliensis. J. Clin. Pathol. 46:829-831.
• BAYLIS, C.L., (editor) (2007) Manual of Microbiological Methods for the Food and Drinks Industry. 5th Edition Method 3.3.1:2007. CCFRA. Chipping Campden. U.K.
• BOLTON, F.J. (2000) Methods for isolation of campylobacters from humans, animals, food and water. In "The increasing incidence of human campylobacteriosis" Report and Proceedings of a WHO Consultation of Experts. Copenhagen Denmark 21-25 November 2000, WHO/CDS/CSRAPH 2001. p. 87-93.
• BOLTON, F.J. & D. COATES (1983) Development of a blood-free campylobacter medium: screening tests on basal media and supplements, and the ability of selected supplements to facilitate aerotolerance. J. Appl. Bacteriol. 54:115-125.
• BOLTON, F.J., D. COATES & D.N. HUTCHINSON (1984) The ability of Campylobacter media supplements to neutralize photochemically induced toxicity and hydrogen peroxide. J. Appl. Bacteriol. 56:151-157.
• CORRY, J.E.L., H. IBRAHIM ATABAY, S.J. FORSYTHE & L.P. MANSFIELD (2003) Culture Media for the isolation of campylobacters, helicobacters and arcobacters. In Handbook of Culture Media for Food Microbiologists. J.E.L. Corry et al. (Eds.) Elsevier Science B.V. Amsterdam.
• CORRY, J.E.L., G.D.W. CURTIS & R.M. BAIRD (2003) Handbook of culture media for food Microbiology. Elsevier Sci. B.V. Amsterdam.
• FDA (Food and Drug Administration) (1998) Bacteriological Analytical Manual. 8th Edition. Rev. A. AOAC International. Gaithersburg, Maryland, USA.
• HUNT, J.M., C. ABEYTA & T. TRAN (1998) Campylobacter. In FDA BAM 8th Edition (rev. A) 7.01-7.027 AOAC International. Gaithersburg, Md, USA.
• HUTCHINSON, D.N. & F.J. BOLTON (1984) Improved blood-free selective medium for the isolation of Campylobacter jejuni from faecal specimens. J. Clin. Pathol. 37:956-957.
• ISO 10272-1 Standard (2017) Microbiology of the food chain - Horizontal Method for detection and enumeration of Campylobacter spp. - Part 1: Detection method.
• ISO 10272-2 Standard (2017) Microbiology of the food chain - Horizontal Method for detection and enumeration of Campylobacter spp. - Part 2: Colony count technique.
• ISO 11133:2014/Amd 1:2018. Microbiology of food, animal feed and water. Preparation, production, storage and performance testing of culture media.
• STERN, N.J., J.E. LINE & H.C. CHEN (2001) Campylobacter In "Compendium of methods for the Microbiological Examination of Foods" 4th Ed. F.P. Downes & K. Ito (Eds.) APHA, Washington DC. USA.