Clostridium Difficile Supplement

Descrizione

Clostridium difficile fu isolato per la prima volta dal meconio e dalle feci di neonati nel 1935 da Hall e O'Toole, che proposero il nome "difficile" perché era molto difficile da isolare. Keighley associò Clostridium difficile alla colite e alla diarrea dopo una terapia antibiotica successiva a interventi gastrointestinali. Nel 1979 George et al. svilupparono un terreno chiamato CCFA (cycloserine-cefoxitin-fructose agar), un terreno senza sangue basato sull'agar al tuorlo d'uovo di McClung e Toabe, con il fruttosio al posto del glucosio. La combinazione di Clostridium Difficile Agar con il supplemento si basa su questo terreno.

Gli agenti selettivi D-cicloserina e cefoxitina inibiscono la crescita della maggior parte delle Enterobacteriaceae, oltre che di Enterococcus faecalis, degli stafilococchi, dei bacilli anaerobi Gram-negativi non sporigeni e delle specie di clostridi (eccetto Clostridium difficile), che possono essere presenti in grandi quantità nei campioni fecali.

Tecnica

Ricostituire in modo asettico 1 fiala con 5 mL di acqua distillata sterile. Mescolare delicatamente fino a completa dissoluzione e aggiungere in modo asettico a 500 mL di Clostridium Difficile Agar Base (LC-1447), autoclavato e raffreddato a 50 °C, insieme al 7 % di sangue di cavallo defibrinato. Mescolare bene e distribuire in piastre di Petri.

Istruzioni per l'uso

• In una piastra di Petri, aggiungere 12-15 mL di agar fuso e lasciar solidificare.
• Inoculare leggermente il terreno con il campione fecale, distribuendo 10 µL dell'inoculo originale per ottenere colonie ben separate.
• Incubare le piastre a 35-37 °C per 18-48 ore in una normale giara per anaerobiosi.
• Dopo 48 ore di incubazione le colonie di Clostridium difficile hanno un diametro di 4-6 mm e sono irregolari, rilevate, opache, bianco-grigie.

Ricostituire la fiala liofilizzata originale aggiungendo 5 mL di acqua distillata sterile.

Nota: ogni fiala è sufficiente per integrare 500 mL di Clostridium Difficile Agar Base.

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Ricostituire 1 fiala come indicato in Composizione; agitare e sciogliere completamente.

Aggiungere 1 fiala a 500 mL di terreno base. NON RISCALDARE dopo l'aggiunta del supplemento.

Inoculo: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ (selettività).

Atmosfera con il 5 % di CO₂. Incubazione a 35-37 °C per 24-48 h.

Controllo di sterilità

Aggiungere 5 mL del campione a 100 mL di TSB e a 100 mL di Thioglycollate.

Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.

• George W.L., Sutter V.L., Goldstein E.C.J., Ludwig S.L. and Finegold S.M. (1978) Lancet. i. 802-803.
• Hall I. and O'Toole E. (1935) Am. J. Dis. Child. 49. 390.
• Keighley M.R.B., Burdon D.W., Alexander Williams J. et al (1978) Lancet ii. 1165-1167.