Legionella MWY

Descrizione

L'aggiunta di agenti antimicrobici conferisce selettività al terreno. Il blu di bromotimolo e il porpora di bromocresolo colorano le colonie e permettono di identificare i microrganismi.

ISO 11731 raccomanda la procedura seguente per l'isolamento di Legionella e la sua conta nei campioni di acqua. I campioni si concentrano per filtrazione su membrana, si diluiscono o si inoculano direttamente sulla piastra, a seconda dell'origine e delle caratteristiche del campione. In caso di alta concentrazione di Legionella e di altri batteri, frazioni indipendenti del campione diluito vanno sottoposte a trattamenti termici o acidi. Questi campioni si trasferiscono sulle piastre con il terreno di coltura selettivo scelto per Legionella.

Tecnica

Ricostituire in modo asettico 1 fiala con 10 mL di acqua distillata o deionizzata. Mescolare delicatamente fino a completa dissoluzione e aggiungere in modo asettico a 500 mL di terreno Legionella BCYE Agar ISO (LC-1311 + LC-6022) raffreddato a 50 °C. Mescolare bene e distribuire in contenitori sterili.

Per la coltivazione di Legionella secondo ISO 11731.

Se il campione contiene un'alta concentrazione di Legionella e una bassa concentrazione di microrganismi interferenti:

• Inoculare direttamente 0,1-0,5 mL del campione, distribuendolo uniformemente su una piastra di BCYE Agar (LC-1311 + LC-6022) e su una piastra di BCYE+AB.

Se il campione contiene una bassa concentrazione di Legionella e una bassa concentrazione di microrganismi interferenti:

• Filtrare il campione iniziale su membrana.
• Porre il filtro sulla piastra di BCYE.
• Ripetere il procedimento per GVPC Agar (LC-1311 + LC-6025) e/o MWY Agar (LC-1311 + questo supplemento).

Se il campione contiene un'alta concentrazione di microrganismi interferenti:

• Il campione sarà inoculato direttamente, concentrato o diluito.
• Dividere ogni tipo di campione in tre porzioni. La prima si usa senza trattamento, la seconda si sottopone a un trattamento termico e la terza a un trattamento acido.
• Inoculare 0,1-0,5 mL su piastre di GVPC Agar e di MWY Agar.

Se il campione contiene una quantità estremamente alta di microrganismi interferenti:

• Il campione sarà inoculato direttamente e diluito.
• Ogni campione si sottopone a un trattamento combinato termico e acido.
• Inoculare 0,1-0,5 mL su piastre di GVPC Agar e di MWY Agar.
• Lasciare riposare le piastre seminate finché l'inoculo non è stato assorbito. Incubare a 36 ± 2 °C per 7-10 giorni.
• Confermare le colonie presunte di Legionella su BCYE Agar e BCYE-cys Agar.

Ricostituire la fiala liofilizzata originale aggiungendo 10 mL di acqua distillata sterile.

Nota: ogni fiala è sufficiente per integrare 500 mL di Legionella BCYE Agar Base (LC-1311).

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Aggiungere 1 fiala a 500 mL di terreno base. NON RISCALDARE dopo l'aggiunta del supplemento.

Inoculo: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ (selettività).

Aerobiosi. Incubazione a 36 ± 2 °C. Lettura a 2-5 giorni.

Controllo microbiologico secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018.

Controllo di sterilità

100 mL di TSB e 100 mL di Thioglycollate.

Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.

• Feeley J.C., Gorman G.W., Weaver R.E., Mackel D.C.
• International standard ISO 11731 Water quality - Detection and enumeration of Legionella.