Bolton Selective Supplement

Descrizione

I batteri del genere Campylobacter sono Gram-negativi e microaerofili e possono essere presenti nel latte, nelle acque non trattate o negli alimenti poco cotti.

Gli organismi danneggiati in genere non vengono rilevati e quindi nelle procedure di analisi va inclusa una fase di recupero. Questo è importante soprattutto nell'industria alimentare, perché vari processi, come calore, essiccamento, processi di conservazione, variazioni del pH, ecc., causano lesioni subletali a Campylobacter. Il brodo è ricco di nutrienti e dà alti tassi di rivitalizzazione dei batteri con lesioni subletali e una crescita intensa.

Il peptone di carne fornisce azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'idrolizzato di lattoalbumina fornisce azoto, aminoacidi, vitamine e carbonio ed è particolarmente indicato nei terreni di coltura per la crescita di Campylobacter. L'estratto di lievito è fonte di vitamine, in particolare del gruppo B. Il cloruro di sodio fornisce gli elettroliti essenziali per il trasporto. L'acido alfa-chetoglutarico è aggiunto per soddisfare le esigenze nutrizionali specifiche delle specie di Campylobacter. Il piruvato di sodio è una fonte di energia per il metabolismo batterico e favorisce la rivitalizzazione degli organismi stressati. Il carbonato di sodio è un regolatore del pH. L'emina fornisce il fattore X, che stimola la crescita di molti microrganismi. L'aggiunta di Bolton Broth Selective Supplement inibisce i batteri Gram-positivi di accompagnamento grazie al trimetoprim, i batteri Gram-negativi grazie a vancomicina, cefoperazone e trimetoprim, e i lieviti e le muffe grazie all'amfotericina B.

Tecnica

Ricostituire in modo asettico 1 fiala con 2,5 mL di acqua distillata sterile/etanolo 1:1. Mescolare delicatamente fino a completa dissoluzione. Aggiungere in modo asettico una fiala a 475 mL di Bolton Selective Enrichment Broth Base (LC-1441), autoclavato e raffreddato sotto i 47 °C, + 25 mL di sangue di cavallo lisato sterile. Mescolare bene e distribuire in contenitori sterili.

Istruzioni per l'uso

Per la rilevazione e la conta di Campylobacter spp. nei campioni con basso numero di campilobatteri e basso livello di microflora di fondo e/o con campilobatteri stressati, secondo ISO 10272:

• Aggiungere la porzione da analizzare al terreno di arricchimento liquido Bolton Broth. In generale, per preparare la sospensione iniziale, unire una quantità di 10 g o 10 mL della porzione da analizzare a 90 mL di Bolton Broth.
• Incubare in atmosfera microaerobica a 37 °C per 4-6 h, poi a 41,5 °C per 44 ± 4 h.
• Con la coltura di arricchimento ottenuta, inoculare due terreni selettivi: CCDA agar (LC-1129) e un altro terreno selettivo qualsiasi basato su principi selettivi diversi.
• Incubare i terreni solidi selettivi a 41,5 °C in atmosfera microaerobica per 44 h, per rilevare la presenza di colonie sospette di Campylobacter.
• Esaminare al microscopio la morfologia e la motilità delle colonie sospette di Campylobacter, trapiantarle su un agar al sangue non selettivo e poi confermarle con la rilevazione dell'attività ossidasica e con una prova di crescita in aerobiosi a 25 °C.

Ricostituire la fiala liofilizzata originale aggiungendo 2,5 mL di acqua distillata sterile/etanolo (50:50).

Nota: ogni fiala è sufficiente per integrare 500 mL di Bolton Selective Enrichment Broth.

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Ricostituire 1 fiala come indicato in Composizione; agitare e sciogliere completamente.

Aggiungere 1 fiala a 500 mL di terreno base. NON RISCALDARE dopo l'aggiunta del supplemento.

Microaerofilia. 37 ± 1 °C per 5 ± 1 h; poi 41,5 ± 1 °C per 44 ± 4 h.

Dopo l'incubazione, trapiantare su terreni appropriati.

Controllo microbiologico secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018.

Controllo di sterilità

Aggiungere 5 mL del campione a 100 mL di TSB e a 100 mL di Thioglycollate.

Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.

• ISO 10272-1:2017 Microbiology of the food chain. Horizontal method for detection and enumeration of Campylobacter spp. Part 1: Detection method.
• Post, D. E. (1995). Food-Borne Pathogens Monograph Number 3 Campylobacter.
• Bolton, F.J. (1995) Personal communication.
• Hunt, J.M. (1998) Campylobacter. In: F.D.A. Bacteriological Analytical Manual, 8th Edition (Rev. A) 7.01-7.27. AOAC, Arlington Va.