Bolton Selective Enrichment Broth Base ISO

I batteri del genere Campylobacter sono Gram-negativi e microaerofili e possono essere presenti nel latte, nelle acque non trattate o negli alimenti poco cotti.

Gli organismi danneggiati in genere non vengono rilevati e quindi nelle procedure di analisi va inclusa una fase di recupero. Questo è importante soprattutto nell'industria alimentare, perché vari processi, come calore, essiccamento, processi di conservazione, variazioni del pH, ecc., causano lesioni subletali a Campylobacter. Il brodo è ricco di nutrienti e dà alti tassi di rivitalizzazione dei batteri con lesioni subletali e una crescita intensa.

Il peptone di carne fornisce azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'idrolizzato di lattoalbumina fornisce azoto, aminoacidi, vitamine e carbonio ed è particolarmente indicato nei terreni di coltura per la crescita di Campylobacter. L'estratto di lievito è fonte di vitamine, in particolare del gruppo B. Il cloruro di sodio fornisce gli elettroliti essenziali per il trasporto. L'acido alfa-chetoglutarico è aggiunto per soddisfare le esigenze nutrizionali specifiche delle specie di Campylobacter. Il piruvato di sodio è una fonte di energia per il metabolismo batterico e favorisce la rivitalizzazione degli organismi stressati. Il carbonato di sodio è un regolatore del pH. L'emina fornisce il fattore X, che stimola la crescita di molti microrganismi. L'aggiunta di Bolton Broth Selective Supplement inibisce i batteri Gram-positivi di accompagnamento grazie al trimetoprim, i batteri Gram-negativi grazie a vancomicina, cefoperazone e trimetoprim, e i lieviti e le muffe grazie alla cicloesimide.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 13,8 grammi di terreno in 475 mL di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti. Raffreddare a < 47 °C e aggiungere in condizioni asettiche una fiala di Bolton Selective Supplement (LC-6070) e 25 mL di sangue di cavallo lisato sterile. Omogeneizzare delicatamente e distribuire in provette.

Secondo ISO 10272

Per la rilevazione e la conta di Campylobacter spp. nei campioni con basso numero di campilobatteri e basso livello di microflora di fondo e/o con campilobatteri stressati, secondo ISO 10272:

1. Aggiungere la porzione da analizzare al terreno di arricchimento liquido Bolton Broth. In generale, per preparare la sospensione iniziale, unire una quantità di 10 g o 10 mL della porzione da analizzare a 90 mL di Bolton Broth.
2. Incubare in atmosfera microaerobica a 37 °C per 4-6 h, poi a 41,5 °C per 44 ± 4 h.
3. Con la coltura di arricchimento ottenuta, inoculare due terreni selettivi: CCDA agar (LC-1129) e un altro terreno selettivo qualsiasi basato su principi selettivi diversi.
4. Incubare i terreni solidi selettivi a 41,5 °C in atmosfera microaerobica per 44 h, per rilevare la presenza di colonie sospette di Campylobacter.
5. Esaminare al microscopio la morfologia e la motilità delle colonie sospette di Campylobacter, trapiantarle su un agar al sangue non selettivo e poi confermarle con la rilevazione dell'attività ossidasica e con una prova di crescita in aerobiosi a 25 °C.

• ISO 10272-1:2017 Microbiology of the food chain. Horizontal method for detection and enumeration of Campylobacter spp. Part 1: Detection method.
• Post, D. E. (1995). Food-Borne Pathogens Monograph Number 3 Campylobacter.
• Bolton, F.J. (1995) Personal communication.
• Hunt, J.M. (1998) Campylobacter. In: F.D.A. Bacteriological Analytical Manual, 8th Edition (Rev. A) 7.01-7.27. AOAC, Arlington Va.