m-CP Supplement

Descrizione

In m-CP Medium l'assenza di attività beta-D-glucosidasica (un enzima coinvolto nella fermentazione del cellobiosio), la fermentazione del saccarosio e la produzione di fosfatasi acida servono a distinguere le colonie presuntive di Clostridium perfringens dalle altre Clostridium spp.

L'assenza di attività beta-D-glucosidasica fa sì che Clostridium perfringens non scinda il cromogeno del terreno, l'indossil-beta-D-glucoside. Inoltre, poiché gli organismi fermentano il saccarosio del terreno abbassando il pH, il porpora di bromocresolo vira dal porpora al giallo. Ne risultano le caratteristiche colonie gialle opache di Clostridium perfringens.

La maggior parte delle altre Clostridium spp. appare come colonie porpora, per l'assenza di fermentazione del saccarosio, oppure come colonie blu/verdi, quando l'organismo scinde comunque l'indossil-beta-D-glucoside e fermenta anche il saccarosio.

La D-cicloserina, la polimixina B e l'incubazione a 44 °C inibiscono la crescita della flora di fondo, come gli organismi Gram-negativi e gli stafilococchi.

m-CP Medium è ora raccomandato dalla Direttiva europea 98/83/CE del Consiglio per l'analisi della qualità delle acque destinate al consumo umano.

Tecnica

Raccogliere, diluire e preparare campioni e volumi secondo le specifiche, le direttive, le norme ufficiali e/o i risultati attesi.

Ricostituire la fiala con 10 mL del diluente sterile in condizioni asettiche, agitare per qualche secondo e aggiungerla a 500 mL del terreno base raffreddato a 50 °C.

Non surriscaldare dopo l'aggiunta del supplemento.

Versare il terreno completo in piastre di Petri e, una volta solidificato su una superficie piana, inocularlo con la membrana con pori da 0,45 µm con cui è stato filtrato il campione.

Incubare le piastre in anaerobiosi a 44 °C per 20-24 h.

A seconda del campione e delle specifiche possono essere necessari tempi di incubazione più lunghi di quelli indicati sopra o temperature di incubazione diverse.

Ogni laboratorio deve valutare i risultati secondo le proprie specifiche.

Le colonie presuntive positive di Clostridium perfringens si possono sottoporre a un'ulteriore prova dell'attività della fosfatasi acida, esponendole ai vapori di idrossido di ammonio per 20-30 secondi. Le colonie di Clostridium perfringens diventano rosa o rosse, perché la fosfatasi acida scinde la fenolftaleina difosfato. Nelle colonie di organismi privi di fosfatasi acida non si vede nessun cambiamento di colore. È importante eseguire questa ulteriore prova, perché esiste un numero molto piccolo di clostridi non perfringens che producono colonie gialle. Queste colonie, però, restano gialle dopo l'esposizione all'idrossido di ammonio, perché sono fosfatasi acida negative.

Ricostituire la fiala liofilizzata originale aggiungendo 10 mL di acqua distillata sterile.

Nota: ogni fiala è sufficiente per integrare 500 mL di m-CP Agar Base.

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Aggiungere 1 fiala a 500 mL di terreno base. NON RISCALDARE dopo l'aggiunta del supplemento.

Inoculo: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ (selettività).

Metodologia analitica secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018; A2:2020.

Anaerobiosi. Incubazione a 44 ± 1 °C per 21 ± 3 h.

Controllo di sterilità

Aggiungere 5 mL del campione a 100 mL di TSB e a 100 mL di Thioglycollate.

Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

• European Council (1997) Directive 12767/97 on the quality of water destined for human consumption. EC Bull. 16-12-1997.
• ISO 11133:2014/Amd 1:2018. Microbiology of food, animal feed and water. Preparation, production, storage and performance testing of culture media.