Legionella GVPC Supplement ISO

Descrizione

Il supplemento selettivo Legionella GVPC, aggiunto alla base agar, fornisce il supporto antibiotico per ottenere un terreno finale selettivo.

La selettività aumenta con l'aggiunta di vancomicina, che agisce contro i batteri Gram-positivi, di polimixina B, che inibisce i batteri Gram-negativi, e di cicloesimide o natamicina, agenti antifungini che inibiscono la crescita dei lieviti.

Tecnica

Raccogliere, diluire e preparare campioni e volumi secondo le specifiche, le direttive, le norme ufficiali e/o i risultati attesi.

Ricostituire 1 fiala di supplemento selettivo GVPC con 10 mL di acqua distillata sterile, in condizioni asettiche, e aggiungerla a 500 mL di Legionella BCYE Agar Base fuso, raffreddato a 47-50 °C e già integrato con il supplemento di crescita Legionella BCYE. Non surriscaldare dopo l'aggiunta del supplemento.

Versare il terreno completo in piastre di Petri e, una volta solidificato su una superficie piana, seminare le piastre per striscio o con il metodo MF.

Lasciare riposare le piastre inoculate finché l'inoculo non è stato assorbito. Capovolgere le piastre e incubare a 36 ± 2 °C fino a 2, 3, 5-10 giorni. Per mantenere umida l'atmosfera dell'incubatore, mettere una vaschetta d'acqua sul fondo dell'incubatore. Rabboccare la vaschetta con acqua fresca (se necessario) ogni volta che si esaminano le piastre. L'incubazione in atmosfera d'aria con il 2,5 % (frazione di volume) di CO₂ può favorire la crescita di alcune Legionella, ma non è essenziale.

Esaminare le piastre con un microscopio per piastre almeno tre volte, a intervalli di 2, 3 e fino a 5 giorni, durante il periodo di incubazione di 10 giorni, perché Legionella cresce lentamente e può essere mascherata dalla crescita di altri microrganismi. Registrare il numero di ciascun tipo di colonia presente.

Le colonie di Legionella sono spesso di colore bianco-grigio-blu-porpora, ma possono essere marroni, rosa, verde lime o rosso intenso. Sono lisce, con bordi regolari, e hanno un caratteristico aspetto a vetro smerigliato. Alla luce ultravioletta le colonie di diverse specie hanno un'autofluorescenza bianca brillante, altre sono rosse e L. pneumophila appare verde opaco, spesso con sfumature gialle. Tutte le colonie presuntive vanno confermate con metodi colturali, biochimici, sierologici o genetici.

Ricostituire la fiala liofilizzata originale aggiungendo 10 mL di acqua distillata sterile.

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Ricostituire 1 fiala come indicato in Composizione; agitare e sciogliere completamente.

Aggiungere 1 fiala a 500 mL di terreno base. NON RISCALDARE dopo l'aggiunta del supplemento.

Metodologia analitica secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018; A2:2020.

Aerobiosi. Incubazione a 36 ± 2 °C. Lettura a 2-5 giorni per L. pneumophila, a 5-10 giorni per L. anisa e a 3 giorni per la selettività.

Controllo microbiologico secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018.

Il terreno di riferimento è GVPC convalidato.

Controllo di sterilità

Aggiungere 5 mL del campione a 100 mL di TSB e a 100 mL di Thioglycollate.

Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.

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