Listeria Lipase C Supplement

Descrizione

La selettività si ottiene con l'alta concentrazione di cloruro di litio e con la miscela di antimicrobici. L'attività differenziale si deve al substrato cromogenico che rileva l'enzima beta-glucosidasi, presente in tutte le specie di Listeria.

L'identificazione specifica si ottiene con L-alpha-fosfatidilinositolo, che fa da substrato per una fosfolipasi C presente solo in Listeria monocytogenes e in alcuni ceppi di Listeria ivanovii. La combinazione dei due substrati permette di distinguere L. monocytogenes, che forma colonie blu-verdi circondate da una zona opaca, dalle altre specie di Listeria, che formano colonie blu-verdi ma senza alone. Questa differenziazione è evidente dopo l'incubazione delle piastre per 24 ± 2 ore a 37 °C.

A volte, soprattutto con campioni molto contaminati, può capitare che alcune colonie, di colore bianco, non siano colonie di Listeria. In questo caso si raccomanda un passaggio di arricchimento prima dell'inoculo delle piastre.

Osservazioni: anche la maggior parte dei ceppi di Listeria ivanovii produce un alone opaco intorno alle colonie dopo 48 h di incubazione. Questa evidenza presuntiva va confermata con le prove di identificazione biochimiche o sierologiche (fermentazione degli zuccheri ramnosio / xilosio, prove di emolisi, CAMP test, ecc.) o con qualsiasi prova che confermi la specie senza incertezze.

Tecnica

Aggiungere 1 flacone di supplemento di arricchimento Ottaviani & Agosti (24 mL) e 1 fiala di supplemento selettivo Ottaviani & Agosti per completare 500 mL di terreno.

Omogeneizzare mescolando e distribuire in piastre di Petri. Il terreno solidificato e freddo appare uniformemente torbido.

Esistono molte metodologie standardizzate (ISO, FDA-BAM, AOAC, AFNOR, ecc.). Il tecnico deve seguire il protocollo convalidato nel suo laboratorio.

Nota: ogni fiala è sufficiente per integrare 470 mL di Listeria Agar Base secondo Ottaviani e Agosti.

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Semina a spirale: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ UFC (selettività).

Aggiungere al terreno base per Listeria.

Controllo microbiologico secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018.

Metodologia analitica secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018; A2:2020.

Aerobiosi. Incubazione a 37 ± 1 °C, lettura dopo 44 ± 4 h.

Controllo di sterilità

Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.

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