TTC 1% Supplement

Descrizione

Questo colorante è incolore nella forma ossidata e rosso quando è ridotto dai microrganismi vivi, per la formazione di formazano, un pigmento rosso insolubile che resta all'interno di granuli nelle cellule. A seconda della concentrazione, il TTC può inibire in misura molto lieve la crescita microbica degli organismi Gram-positivi.

Tecnica

Ricostituire in modo asettico 1 fiala con 5 mL di acqua distillata sterile. Mescolare delicatamente fino a completa dissoluzione e aggiungere in modo asettico 2,5 mL a 1000 mL di TTC Chapman Agar (LC-1076), autoclavato e raffreddato a 45-50 °C. Mescolare bene e distribuire in contenitori sterili.

Quando il TTC va aggiunto ad altri terreni, come KF Streptococcal Agar (LC-1034) o KF Streptococcal Agar with Bromocresol Purple (LC-1101), seguire le istruzioni specifiche del terreno per la quantità di TTC 1% Supplement da aggiungere.

Istruzioni per l'uso

Per la rilevazione e la conta di Escherichia coli e dei batteri coliformi nei campioni di acqua:

• Filtrare due campioni di acqua su due membrane diverse e incubare su TTC Chapman Agar (LC-1076) rispettivamente a 36 ± 2 °C e a 44 ± 4 °C per 21 ± 3 ore.

Le colonie tipiche hanno questo aspetto:

• E. coli e Citrobacter spp. formano colonie gialle con il centro arancione.
• Enterobacter spp. forma colonie rosse e giallo scuro con il centro arancione. Il terreno è giallo.
• Klebsiella spp. forma colonie rosse o gialle, ma senza centro. Il terreno è giallo.
• I batteri che non fermentano il lattosio crescono con colonie porpora e fanno virare il terreno al blu.

Anche le specie di Klebsiella ed Enterobacter possono produrre colonie giallo-verdi.

I risultati si riferiscono sempre a conte per 100 mL di campione, tenendo conto delle eventuali diluizioni necessarie.

• Contare come batteri lattosio-positivi le colonie che presentano uno sviluppo giallo del terreno sotto la membrana.
• Trapiantare le colonie caratteristiche ottenute su agar non selettivo e in Tryptophan Culture Broth (LC-1237).
• Eseguire la prova dell'ossidasi e incubare le provette di Tryptophan Culture Broth a 44 ± 0,5 °C per 21 ± 3 ore.
• La produzione di indolo si determina aggiungendo alcune gocce di Kovac's Reagent (LC-5205) alle provette di Tryptophan Culture Broth incubate. La prova è positiva se nello strato del reattivo si sviluppa un colore rosso.
• Le colonie ossidasi negative si considerano batteri coliformi e le colonie ossidasi negative e indolo positive si considerano E. coli.

Ricostituire la fiala liofilizzata originale aggiungendo 5 mL di acqua distillata sterile.

Nota: ogni fiala è sufficiente per integrare 2 L di Chapman Agar.

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Ricostituire 1 fiala come indicato in Composizione; agitare e sciogliere completamente.

Aggiungere 1 fiala a 2 L di terreno base. NON RISCALDARE dopo l'aggiunta del supplemento.

Raffreddare il terreno a 50 °C e versarlo in piastre per MF.

Filtrazione su membrana / intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ UFC (selettività).

Aerobiosi. Incubazione a 36 ± 2 °C, lettura a 21 ± 3 h.

Controllo di sterilità

Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.

• Kennor, G.A., Clark, H.F. and Kabler, P.W. (1961) J. Appl. Microbiol. 9: 15-20.
• Slanetz, L.W. and Bartley, C.H. (1957) J. Bact. 74: 591-595.
• Chapman, G.H. (1947) J. Bact. 53: 504.
• Nordic Committee on Food Analysis (1968) Leaflet 68.