Terreni disidratati
TTC Chapman Agar (Lactose Agar TTC with Tergitol 7)
Per la rilevazione e la conta di E. coli e dei coliformi nelle acque potabili con la tecnica di filtrazione su membrana.
- Codice
- LC-1076
- Categoria
- Terreni disidratati
- Formato
- 500 g
- Conservazione
- da 2 a 25 °C
- Validità minima garantita
- 15 mesi
TTC Chapman Agar (Lactose Agar TTC with Tergitol 7) è un terreno selettivo e differenziale usato per il controllo presuntivo di E. coli e dei coliformi nelle acque destinate al consumo umano con la tecnica di filtrazione su membrana.
Supplemento da aggiungere: TTC 1% Supplement LC-6030
Caratteristiche principali
Applicazioni
Rilevazione e conta selettiva dei coliformi e di Escherichia coli.
Settori
Acque.
Preparazione
56,15 g in un litro di acqua distillata; far bollire per un minuto, sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti, aggiungere 2,5 mL di TTC 1% Supplement (LC-6030).
Principio e uso
Il peptone e l'estratto di manzo forniscono azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'estratto di lievito è fonte di vitamine, in particolare del gruppo B. Il lattosio è un carboidrato fermentabile che fornisce carbonio ed energia. L'eptadecilsolfato di sodio (Tergitol 7) e il TTC inibiscono la maggior parte dei batteri Gram-positivi. Il blu di bromotimolo è un indicatore di pH. L'agar batteriologico è l'agente solidificante.
Specifiche tecniche
| Solubilità | Senza residui |
|---|---|
| Aspetto | Polvere fine |
| Colore del terreno disidratato | Beige verdastro |
| Colore del terreno preparato | Verde |
| pH finale (25 °C) | 7,2 ± 0,1 |
| Quantità per litro | 56,15 g |
| Conservazione | da 2 a 25 °C |
Formula
| Componente | g/L |
|---|---|
| Blu di bromotimolo | 0,05 |
| Agar batteriologico | 15 |
| Estratto di manzo | 5 |
| Lattosio | 20 |
| Peptone | 10 |
| Eptadecilsolfato di sodio (Tergitol 7) | 0,1 |
| Estratto di lievito | 6 |
Preparazione e uso
Preparazione
Sospendere 56,15 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti. Raffreddare a 45-50 °C e aggiungere in asepsi 2,5 mL di TTC 1% Supplement (LC-6030) a 1 litro di terreno. Omogeneizzare delicatamente e distribuire in piastre di Petri. NON SURRISCALDARE.
Istruzioni per l'uso
Per la rilevazione e la conta di Escherichia coli e dei batteri coliformi nei campioni di acqua:
- Filtrare due campioni di acqua su due membrane diverse e incubare su TTC Chapman Agar rispettivamente a 36 ± 2 °C e a 44 ± 4 °C per 21 ± 3 ore.
Le colonie tipiche hanno questo aspetto:
- E. coli e Citrobacter spp. presentano colonie gialle con il centro arancione.
- Enterobacter spp. forma colonie rosse e giallo scuro con il centro arancione. Il terreno è giallo.
- Klebsiella spp. forma colonie rosse o gialle, ma senza centro. Il terreno è giallo.
- I batteri che non fermentano il lattosio crescono con colonie viola e fanno virare il terreno al blu.
Le specie di Klebsiella ed Enterobacter possono produrre anche colonie giallo-verdi.
I risultati si riferiscono sempre a conte per 100 mL di campione, tenendo conto delle eventuali diluizioni che è stato necessario fare.
- Contare come batteri lattosio-positivi le colonie che presentano uno sviluppo giallo del terreno sotto la membrana.
- Trapiantare le colonie caratteristiche ottenute su agar non selettivo e in Tryptophan Culture Broth (LC-1237).
- Eseguire la prova dell'ossidasi e incubare le provette di Tryptophan Culture Broth a 44 ± 0,5 °C per 21 ± 3 ore.
- La produzione di indolo si determina aggiungendo alcune gocce di Kovac's Reagent (LC-5205) alle provette di Tryptophan Culture Broth incubate. Una prova positiva è indicata dalla comparsa di un colore rosso nello strato del reattivo.
- Le colonie ossidasi-negative saranno considerate batteri coliformi e le colonie ossidasi-negative e indolo-positive saranno considerate E. coli.
Controllo qualità
Secondo ISO 11133
Condizioni di incubazione: 36 ± 2 °C / 21 ± 3 h.
Condizioni di inoculo: produttività quantitativa (100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC) / selettività (10⁴-10⁶ UFC) / specificità (10³-10⁴ UFC).
Terreno di riferimento: lotto di TTC Chapman Agar già validato.
| Microrganismo | Specifica | Reazione caratteristica |
|---|---|---|
| Enterococcus faecalisATCC 19433 | Inibizione totale (0) | |
| Escherichia coliATCC 25922 | Crescita buona, > 70 % | Giallo nella parte centrale sotto la membrana |
| Pseudomonas aeruginosaATCC 27853 | Colonie rosse, colore blu nel terreno | |
| Escherichia coliCECT 8296 | Crescita buona, > 70 % | Giallo nella parte centrale sotto la membrana |
Bibliografia
- Chapman G.H. 1946. A single culture medium for selective isolation of plasma coagulating staphylococci and for improved testing of chromogenesis (J. Bacteriol. 51: 409-410).
- Tittsler R.P. and L.A. Sandholzer. 1936. The Use of Semi-Solid Agar for the detection of bacteria motility. (J. Bacteriol 31: 575-580)
- ISO 9308-1:2000. Water quality. Detection and enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria. Part 1. Membrane filtration method.
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