Legionella BCYE Agar Base ISO

Feeley et al. hanno descritto una modifica di F-G Agar in cui la caseina idrolizzata con acido è stata sostituita dall'estratto di lievito come fonte di proteine, e l'amido dal carbone attivo. Questo terreno, che chiamarono CYE Agar, è stato poi integrato con tampone ACES e alfa-chetoglutarato ed è descritto in letteratura come BCYE-alpha Medium. BCYE-alpha Medium ha dimostrato di dare un recupero ottimale delle Legionellaceae dai campioni ambientali in un periodo di incubazione più breve.

L'estratto di lievito fornisce vitamine, in particolare del gruppo B, e altri cofattori di crescita. La L-cisteina fornisce la fonte nutritiva necessaria. Il carbone attivo è un agente protettivo che neutralizza e assorbe i metaboliti tossici prodotti dalla crescita batterica. Decompone il perossido di idrogeno, un prodotto metabolico tossico, e può anche catturare la CO₂ e modificare la tensione superficiale.

ISO 11731 raccomanda la procedura seguente per l'isolamento di Legionella e la sua conta nei campioni di acqua. I campioni si concentrano per filtrazione su membrana, si diluiscono o si inoculano direttamente sulla piastra, a seconda dell'origine e delle caratteristiche del campione. In caso di alta concentrazione di Legionella e di altri batteri, frazioni indipendenti del campione diluito vanno sottoposte a trattamenti termici o acidi. Questi campioni si trasferiscono sulle piastre con il terreno di coltura selettivo scelto per Legionella.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 12,5 grammi di terreno in 500 mL di acqua distillata. Scaldare fino all'ebollizione e fino a completa dissoluzione del terreno. Distribuire in contenitori adatti e sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti. Raffreddare a 48 ± 3 °C e aggiungere in condizioni asettiche 1 fiala di Legionella BCYE Growth Supplement (LC-6022). Mescolare bene e distribuire in contenitori adatti.

A questo punto si può ottenere GVPC Agar oppure MWY Agar:

• Per ottenere GVPC Agar, aggiungere anche 1 fiala di Legionella GVPC Supplement (LC-6025).
• Per ottenere MWY Agar, aggiungere anche 1 fiala di Legionella MWY Growth Supplement (LC-6067).

In alternativa, si può ottenere BCYE-Cys Agar (BCYE w/o Cysteine) aggiungendo 1 fiala di Legionella BCYE w/o Cysteine Supplement (LC-6092) al posto di LC-6022.

Secondo ISO 11731

Per la coltivazione di Legionella secondo ISO 11731.

Se il campione contiene un'alta concentrazione di Legionella e una bassa concentrazione di microrganismi interferenti:

1. Inoculare direttamente 0,1-0,5 mL del campione, distribuendolo uniformemente su una piastra di BCYE Agar (questo terreno + LC-6022) e su una piastra di BCYE+AB.

Se il campione contiene una bassa concentrazione di Legionella e una bassa concentrazione di microrganismi interferenti:

1. Filtrare il campione iniziale su membrana.
2. Porre il filtro sulla piastra di BCYE.
3. Ripetere il procedimento per GVPC Agar (questo terreno + LC-6022 + LC-6025) e/o MWY Agar (questo terreno + LC-6022 + LC-6067).

Se il campione contiene un'alta concentrazione di microrganismi interferenti:

1. Il campione sarà inoculato direttamente, concentrato o diluito.
2. Dividere ogni tipo di campione in tre porzioni. La prima si usa senza trattamento, la seconda si sottopone a un trattamento termico e la terza a un trattamento acido.
3. Inoculare 0,1-0,5 mL su piastre di GVPC Agar e di MWY Agar.

Se il campione contiene una quantità estremamente alta di microrganismi interferenti:

1. Il campione sarà inoculato direttamente e diluito.
2. Ogni campione si sottopone a un trattamento combinato termico e acido.
3. Inoculare 0,1-0,5 mL su piastre di GVPC Agar e di MWY Agar.
4. Lasciare riposare le piastre finché l'inoculo non è stato assorbito. Incubare a 36 ± 2 °C per 7-10 giorni.
5. Confermare le colonie presunte di Legionella su BCYE Agar e BCYE-cys Agar.

Il contenitore di questo prodotto può deformarsi a causa dell'elevata capacità di adsorbimento dell'ossigeno del carbone attivo contenuto nella formula.

• Feeley J.C., Gorman G.W., Weaver R.E., Mackel D.C.
• International standard ISO 11731 Water quality - Detection and enumeration of Legionella.