Legionella BCYE-cys supplement ISO

Tecnica

Raccogliere e preparare campioni diluiti e volumi secondo necessità, in base alle specifiche, alle linee guida, alle norme ufficiali e/o ai risultati.

Ricostituire la fiala con il diluente sterile allegato e aggiungere in modo asettico a 500 mL di terreno basale (Legionella BCYE Agar Base), già fuso e raffreddato a 50 °C. Mescolare delicatamente e versare in piastre di Petri.

Le piastre inoculate si lasciano riposare finché l'inoculo non è assorbito e poi si incubano, capovolte, a 36 ± 2 °C per 4-10 giorni. Per garantire che l'atmosfera sia abbastanza umida, non si raccomanda di mettere una vaschetta d'acqua nell'incubatore e di riempirla, se necessario, ogni volta che si esaminano le piastre. L'incubazione in atmosfera d'aria con il 2,5 % (v/v) di CO₂ può essere molto utile per la crescita di alcune legionelle, ma non è determinante.

Le piastre si esaminano con una lente d'ingrandimento adeguata almeno tre volte, a intervalli di 2, 3, 5 giorni, durante il periodo di incubazione, perché le legionelle crescono lentamente e possono essere mascherate dalla crescita di altri microrganismi.

Le colonie di Legionella non possono crescere in questo terreno, per la mancanza di cisteina.

Quantità necessaria per 500 mL di terreno completo:

Ricostituire la fiala liofilizzata originale aggiungendo 1 fiala con 9 mL di solvente sterile.

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Aggiungere 1 fiala a 500 mL di terreno base. NON RISCALDARE dopo l'aggiunta del supplemento.

Inoculare 30-300 UFC (produttività), 1000-10.000 UFC (selettività).

Metodologia analitica secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018; A2:2020.

Aerobiosi. Incubazione a 36 ± 2 °C. Lettura a 2-5 giorni.

Controllo di sterilità

Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.

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