Chapman Stone Agar

La modifica principale di questo terreno è l'inclusione del solfato di ammonio, che permette di osservare direttamente l'idrolisi della gelatina invece di aggiungere reattivi al terreno in piastra. Grazie alla presenza del solfato di ammonio nel terreno stesso, non serve coprire la piastra con la soluzione di ammonio per rilevare la liquefazione della gelatina (metodo di Stone). Il solfato di ammonio fa precipitare la gelatina non idrolizzata, perciò intorno alle colonie gelatinasi (+) compare un alone trasparente.

Il peptone di caseina fornisce azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'estratto di lievito è fonte di vitamine, in particolare del gruppo B. Il D-mannitolo è il carboidrato fermentabile che fornisce carbonio ed energia. Il cloruro di sodio, ad alte concentrazioni, inibisce la maggior parte dei batteri tranne gli stafilococchi. La gelatina è una proteina ottenuta per idrolisi del collagene, abbondante in ossa, pelle, tendini, cartilagini e tessuti animali. Si usa nei terreni di coltura per determinare la gelatinolisi da parte dei batteri. Le gelatinasi prodotte dai microrganismi idrolizzano la gelatina, liquefacendo un terreno solido o impedendo la gelificazione di un terreno che contiene gelatina. L'agar batteriologico è l'agente solidificante.

Le colonie stafilococciche sono gialle, giallo oro o arancioni, fermentano il mannitolo, sono coagulasi-positive, producono beta-emolisi in terreni come Blood Agar (LC-1108) e sono gelatinasi-positive (reazione di Stone positiva). Qualunque colonia pigmentata (gialla o arancione tenue) circondata da una zona chiara è probabilmente uno Staphylococcus patogeno. Le colonie pallide, quasi prive di colore o che non producono pigmento, non vanno considerate positive, anche se sono circondate da una zona chiara (alone), e si identificano in via presuntiva come colonie di S. epidermidis.

Si raccomanda di prelevare la colonia, inocularla in 0,1-0,2 mL di Brain Heart Infusion Broth (LC-1400) ed eseguire la prova della coagulasi. Nello stesso tempo, aggiungere una goccia di porpora di bromocresolo nel punto della colonia per determinare la fermentazione del mannitolo: la comparsa di un colore giallo è una reazione positiva. Le zone di alone chiaro intorno alle colonie indicano la degradazione da parte dell'enzima gelatinasi (idrolisi della gelatina).

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 202,5 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 121 °C per 10 minuti. Raffreddare a 50 °C, mescolare bene e distribuire in piastre.

Istruzioni per l'uso

Metodo per striscio su piastra:

1. In una piastra di Petri, aggiungere 12-15 mL di agar fuso e lasciar solidificare.
2. Inoculare 10 µL della sospensione iniziale e/o del campione diluito.
3. Distribuire l'inoculo sulla superficie dell'agar con un'ansa sterile.
4. Incubare le piastre capovolte alla temperatura di 30 ± 2 °C per 18-48 ore.
5. Esaminare la crescita e la presenza o l'assenza di zone chiare (aloni) intorno alle colonie.
6. Per determinare la fermentazione del mannitolo, aggiungere qualche goccia di porpora di bromocresolo. Qualunque cambiamento di colore dell'indicatore, rispetto al terreno non inoculato, indica la fermentazione del mannitolo.

Risultati attesi:

• Fermentazione del mannitolo: positiva = cambiamento di colore dell'indicatore al giallo. Le colonie mannitolo-positive, gialle o arancioni, circondate da una zona chiara si identificano in via presuntiva come Staphylococcus.
• Attività gelatinasica: reazione di Stone positiva = formazione di zone chiare (aloni) intorno alle colonie.

• Chapman J. Bact. 1945. 50: 201.
• Recommended Methods for the Microbiological Examination of Foods APHA. Inc. New York 1958.
• Standard Methods for Examination of Dairy Products, 1st Ed. APHA. Inc. New York, 1960.