Legionella Latex Test

(1) Nota: L. pneumophila sierogruppo 16 è ora citato nel Manual of Clinical Microbiology. Il sierogruppo 16 dovrebbe dare reazione crociata con il sierogruppo 6, quindi in teoria il reagente al lattice 2-15 dovrebbe agglutinare anche con gli isolati del sierogruppo 16.

Il kit è destinato esclusivamente all'uso professionale, solo per la diagnostica industriale e non per l'uso in analisi cliniche.

Nel Test Reagent 1 le particelle di lattice sono rivestite con anticorpi policlonali di coniglio diretti contro L. pneumophila sierogruppo 1. Nel Test Reagent 2-15 le particelle di lattice sono rivestite con anticorpi policlonali di coniglio diretti contro i sierogruppi 2-15. Nel Test Reagent Species le particelle di lattice sono rivestite con anticorpi policlonali di coniglio diretti contro 10 specie di Legionella isolate comunemente (vedi la tabella sotto). Quando queste particelle di lattice sono mescolate con una sospensione che contiene i batteri Legionella corrispondenti, o antigeni inattivati con il calore dei batteri Legionella corrispondenti, avviene una reazione immunochimica che fa agglutinare le particelle di lattice in aggregati facilmente visibili a occhio nudo. Il reagente al lattice rivestito con gli anticorpi del sierogruppo 1 agglutina solo in presenza degli antigeni del sierogruppo 1. Il reagente al lattice rivestito con gli anticorpi dei sierogruppi 2-15 agglutina solo in presenza degli antigeni di uno qualsiasi dei sierogruppi 2-15. Il reagente al lattice rivestito con gli anticorpi delle specie di Legionella agglutina con le 10 specie di Legionella corrispondenti (vedi la tabella sotto).

Le reazioni del Test Reagent 1 con gli antigeni del sierogruppo 1 sono in genere più forti e più rapide di quelle tra il Test Reagent 2-15 e gli antigeni dei sierogruppi 2-15. Ciò è dovuto all'effetto di diluizione della miscela di 15 antisieri diversi durante la produzione del Test Reagent 2-15. Il lattice per le specie di Legionella reagisce in modo simile al lattice per Legionella pneumophila sierogruppo 1.

Contenuto del kit (50 test)

• Test Reagent 1 (M45a, 2,5 mL, tappo blu): particelle di lattice rivestite con anticorpi policlonali di coniglio contro L. pneumophila sierogruppo 1. Conservato con sodio azide allo 0,099 %.
• Test Reagent 2-15 (M45b, 2,5 mL, tappo giallo): particelle di lattice rivestite con anticorpi policlonali di coniglio contro L. pneumophila sierogruppi 2-15. Conservato con sodio azide allo 0,099 %.
• Controllo positivo (M45c, 1,0 mL, tappo nero): sospensione di antigeni di Legionella inattivati, reattiva con Test Reagent 1, 2-15 e Species. Conservato con sodio azide allo 0,099 %.
• Test Reagent Species (M45d, 2,5 mL, tappo rosso): particelle di lattice rivestite con anticorpi policlonali di coniglio contro 10 specie di Legionella isolate comunemente (vedi la tabella sopra). Conservato con sodio azide allo 0,099 %.
• Soluzione fisiologica isotonica 0,85 % (M40, 2 x 5,0 mL, tappo bianco). Conservata con sodio azide allo 0,099 %.
• Vetrini per agglutinazione monouso (25 pz).
• Bastoncini per miscelazione monouso (3 x 25 pz).

Materiale necessario non fornito

• Anse batteriologiche.
• Terreno selettivo per Legionella.
• Provette di vetro per l'ebollizione.
• Soluzione fisiologica isotonica 0,85 %.

Il kit va conservato a 2-8 °C quando non è in uso. Il kit non va usato dopo la data di scadenza stampata sulla confezione.

Prima di usare questo prodotto, leggere le sezioni Precauzioni e Limitazioni. Si ricorda che i controlli indicati nella sezione Controllo qualità vanno eseguiti ogni volta che si usa il kit.

Campioni

Con questo kit si possono provare le colonie cresciute su piastre di agar selettivo. La morfologia delle colonie provate deve somigliare a quella di Legionella. Le colonie devono avere almeno 3 giorni.

Procedura del test

Per il protocollo del controllo positivo, vedi la sezione Controllo qualità.

1. Distribuire 1 goccia di soluzione fisiologica isotonica (M40) su ciascuno dei tre cerchi del vetrino per agglutinazione.
2. Con un'ansa da inoculo, prelevare 3-4 colonie simili a Legionella dalla piastra di agar selettivo e fare uno striscio spesso e uniforme sul vetrino, accanto a ciascuna goccia di soluzione fisiologica.
3. Mescolare le colonie con la soluzione fisiologica isotonica 0,85 % ed emulsionare fino a formare una sospensione densa e omogenea, stendendo il liquido su tutta la superficie del cerchio.
4. Se la sospensione resta omogenea, passare al passo 7. Se la sospensione è "filamentosa" o "granulosa" (spesso per colture vecchie e/o mucose), procedere come segue:
5. Distribuire 0,5 mL di soluzione fisiologica isotonica 0,85 % in una provetta di vetro. Preparare una sospensione torbida e omogenea di microrganismi prelevati dalla piastra di agar selettivo.
6. Far bollire la sospensione per 5 minuti. Lasciare raffreddare a temperatura ambiente. Mettere 30 µL di sospensione bollita su ciascuno dei tre cerchi di un vetrino per agglutinazione.
7. Mescolare delicatamente ciascun reagente al lattice (M45a, M45b e M45d) per ottenere una sospensione omogenea.
8. Aggiungere una goccia di Test Reagent 1 a una delle sospensioni batteriche, una goccia di Test Reagent 2-15 alla seconda sospensione e una goccia di Test Reagent Species alla terza sospensione. Il contagocce del reagente non deve toccare la sospensione.
9. Mescolare reagente e sospensione con un bastoncino nuovo per ogni combinazione. Stendere il liquido su tutta l'area del cerchio.
10. Far oscillare delicatamente il vetrino per 2 minuti e osservare se c'è agglutinazione.
11. Eliminare i bastoncini e i vetrini usati in un disinfettante adatto.

Interpretazione dei risultati

Una reazione di agglutinazione è indicata dall'aggregazione visibile delle particelle di lattice. I risultati di Legionella Latex Test vanno interpretati come segue:

(2) Un quadro di agglutinazione aspecifica non esclude la presenza di batteri Legionella, ma i risultati vanno interpretati come non conclusivi.

Sicurezza

1. Il kit è destinato esclusivamente all'uso professionale, solo per la diagnostica industriale e non per l'uso in analisi cliniche.
2. La sodio azide, usata come conservante nei reagenti del kit, può reagire con le tubature di piombo o di rame formando azidi metalliche potenzialmente esplosive. Smaltire facendo scorrere un grande volume d'acqua, per evitare l'accumulo di azide.
3. Prendere le precauzioni adatte quando si manipolano o si smaltiscono potenziali patogeni. Il materiale infetto si può decontaminare con ipoclorito di sodio alla concentrazione finale del 3 % per 30 minuti. I rifiuti liquidi che contengono acidi vanno neutralizzati prima del trattamento.
4. Il controllo positivo è stato inattivato durante il processo di produzione. Va comunque manipolato come potenzialmente infetto.

Procedura

1. Legionella Latex Test va usato secondo le istruzioni del kit.
2. Portare tutti i reagenti a temperatura ambiente prima dell'uso.
3. Non diluire nessuno dei reagenti del kit.
4. Non mescolare reagenti di lotti diversi di kit.
5. Non congelare nessuno dei reagenti del kit.
6. Il contagocce del reagente al lattice non deve toccare il controllo positivo o i campioni batterici.
7. Fare attenzione a registrare solo l'agglutinazione. Le reazioni "grumose" o "filamentose" possono non essere una vera agglutinazione.
8. Assicurarsi che il vetrino per agglutinazione sia pulito e asciutto prima dell'uso.

1. I risultati vanno interpretati nel contesto di tutte le informazioni di laboratorio disponibili.
2. Le reazioni filamentose sul vetrino possono non essere vere reazioni positive e richiedono altre prove.
3. Le colture vecchie e/o mucose possono non dare una sospensione omogenea in soluzione fisiologica e possono dare un'agglutinazione atipica. Vanno pretrattate con l'ebollizione, come descritto nel metodo sopra.
4. Legionella Latex Test è destinato all'identificazione di L. pneumophila sierotipi 1-15 e alla rilevazione di una serie di 10 specie di Legionella dopo coltura su piastre di agar selettivo. Le colonie positive vanno confermate come Legionella spp. in base alla loro incapacità di crescere su terreni di coltura selettivi per Legionella privi di cisteina.
5. I terreni di produttori diversi possono provocare un'espressione lenta degli antigeni. Gli utilizzatori devono provare i propri terreni con ceppi noti, per assicurarsi che il test funzioni come previsto prima di provare isolati sconosciuti.

I controlli seguenti vanno eseguiti ogni volta che si usa il kit.

1. Controllo dei reagenti: mescolare delicatamente i reagenti al lattice (M45a, M45b, M45d) e aggiungere una goccia di ciascun reagente in cerchi separati del vetrino per agglutinazione. Aggiungere una goccia di soluzione fisiologica (M40) a ciascuna goccia di reagente al lattice. Con un bastoncino diverso per ogni cerchio, mescolare bene il reagente al lattice e la soluzione fisiologica, stendendo il liquido su tutta l'area del cerchio. Far oscillare delicatamente il vetrino per 2 minuti e osservare se c'è agglutinazione. Se si vede agglutinazione, almeno uno dei reagenti è contaminato e va usato un kit nuovo.
2. Controllo positivo: aggiungere una goccia di controllo positivo (M45c) in un cerchio del vetrino per agglutinazione. Mescolare delicatamente Test Reagent 1 (M45a) e aggiungerne 1 goccia nello stesso cerchio. Il contagocce non deve toccare il controllo positivo. Mescolare con un bastoncino, far oscillare delicatamente il vetrino per 2 minuti e osservare se c'è agglutinazione. Si deve vedere un risultato positivo, indicato dall'agglutinazione. Ripetere la procedura con Test Reagent 2-15 (M45b) e Test Reagent Species (M45d). Anche in questo caso si deve vedere un risultato positivo. Se con uno qualsiasi dei tre reagenti al lattice non si vede agglutinazione, va usato un kit nuovo.

NOTA: l'intensità della reazione con il controllo positivo può non essere la stessa.

Smaltire secondo le norme locali, nazionali o regionali.