Staphylococcus Latex Test

Le particelle di lattice sono rivestite con fibrinogeno (a cui si lega la coagulasi) e IgG (che si lega alla proteina A). Quando sono mescolate con una sospensione di S. aureus, le particelle di lattice agglutinano rapidamente formando grumi visibili. In assenza di stafilococchi positivi alla coagulasi/proteina A non si ha un'agglutinazione evidente.

Contenuto del kit (100 test)

• Staph Latex Reagent (M43a, 5 mL, tappo blu): particelle di lattice rivestite con fibrinogeno umano e IgG. Conservato con sodio azide allo 0,099 %.
• Controllo positivo (M43b, 1 mL, tappo nero): preparazione inattivata di S. aureus, conservata con sodio azide allo 0,099 %.
• Vetrini per agglutinazione monouso (25 pz).
• Bastoncini per miscelazione monouso (4 x 25 pz).

Materiale necessario non fornito

• Anse batteriologiche.

Staphylococcus Latex Test va conservato a 2-8 °C quando non è in uso. Il kit non va usato dopo la data di scadenza stampata sulla confezione.

Prima di usare questo prodotto, leggere le sezioni Precauzioni e Limitazioni. I controlli indicati nella sezione Controllo qualità vanno eseguiti ogni volta che si usa il kit.

Campioni

Scegliere 1-2 colonie isolate cresciute per 18-24 ore a 35-37 °C su un terreno di isolamento primario, per esempio agar sangue al 5 %. La morfologia delle colonie provate deve somigliare a quella di S. aureus. Vanno provate colonie singole e pure, per ridurre al minimo la possibilità di risultati errati. Se necessario, isolare con uno striscio su una nuova piastra di agar. Nelle colonie con morfologia atipica si può verificare la colorazione Gram-positiva, per aumentare al massimo la probabilità di aver selezionato stafilococchi per la prova.

Procedura del test

Per il protocollo del controllo positivo, vedi la sezione Controllo qualità.

1. Mescolare il lattice per Staphylococcus capovolgendolo delicatamente e aggiungerne 1 goccia in un cerchio di un vetrino del test pulito e asciutto.
2. Con un'ansa sterile, prelevare una colonia del microrganismo da provare ed emulsionarla nella goccia di reagente al lattice sul vetrino. Stendere sull'area del cerchio con un bastoncino.
3. Far oscillare delicatamente il vetrino per un massimo di 2 minuti e osservare se c'è agglutinazione.
4. Dopo la lettura, eliminare i vetrini e i bastoncini usati in un disinfettante adatto.

Interpretazione dei risultati

L'agglutinazione entro 2 minuti è un risultato positivo e indica la presenza di S. aureus. L'assenza di agglutinazione indica l'assenza di S. aureus e di altri ceppi di Staphylococcus positivi alla coagulasi/proteina A.

Sicurezza

1. Il kit e i reagenti forniti sono destinati esclusivamente all'uso professionale, solo per la diagnostica industriale e non per l'uso in analisi cliniche.
2. La sodio azide, usata come conservante nei reagenti del kit, può reagire con le tubature di piombo o di rame formando azidi metalliche potenzialmente esplosive. Smaltire facendo scorrere un grande volume d'acqua, per evitare l'accumulo di azide.
3. Le IgG e il fibrinogeno usati per sensibilizzare il reagente al lattice derivano da plasma umano analizzato e risultato negativo alla ricerca di anticorpi contro HIV-1, HIV-2 e HCV e di HBsAg. Va comunque manipolato come potenzialmente infetto.
4. Prendere le precauzioni adatte quando si manipolano o si smaltiscono potenziali patogeni. Il materiale infetto si può decontaminare con ipoclorito di sodio alla concentrazione finale del 3 % per 30 minuti. I rifiuti liquidi che contengono acidi vanno neutralizzati prima del trattamento.
5. Il controllo positivo è stato inattivato durante il processo di produzione. Va comunque manipolato come potenzialmente infetto.

Procedura

1. Staphylococcus Latex Test va usato secondo le istruzioni del kit.
2. Portare tutti i reagenti a temperatura ambiente prima dell'uso.
3. Non diluire nessuno dei reagenti del kit.
4. Non mescolare reagenti di lotti diversi di kit.
5. Non congelare nessuno dei reagenti del kit.
6. Il contagocce del reagente al lattice non deve toccare il controllo positivo o i campioni batterici.
7. Fare attenzione a registrare solo l'agglutinazione. Le reazioni "grumose" o "filamentose" possono non essere una vera agglutinazione.
8. Assicurarsi che il vetrino sia pulito e asciutto prima dell'uso.

1. I risultati vanno interpretati nel contesto di tutte le informazioni cliniche e di laboratorio disponibili.
2. Provare solo colonie singole e pure, perché le colonie miste possono dare risultati errati.
3. Le colture di più di 30 ore possono autoagglutinare.
4. I terreni ad alto contenuto di sale, come Mannitol Salt Agar, inibiscono la produzione di proteina A e questo può portare a risultati falsamente negativi.
5. I ceppi rugosi di Staphylococcus possono dare reazioni falsamente positive. Questi ceppi sono rari e si distinguono dai ceppi lisci per la morfologia delle colonie. Se si sospettano, si possono confermare emulsionandoli in una goccia di soluzione fisiologica e osservando con attenzione se la sospensione è omogenea.
6. Le reazioni filamentose sul vetrino possono non essere vere reazioni positive e richiedono altre prove biochimiche.
7. Alcuni lieviti possono dare risultati falsamente positivi.
8. Tutti i ceppi di Staphylococcus coagulasi-positivi reagiscono con Staphylococcus Latex Test, quindi S. aureus non si può distinguere da S. intermedius e S. hyicus. Questi ultimi due ceppi però sono isolati raramente da fonti umane e si trovano più spesso negli animali o come saprofiti.
9. Staphylococcus Latex Test è destinato all'identificazione di presunti S. aureus. Le colonie positive vanno confermate come S. aureus con prove biochimiche.

I controlli seguenti vanno eseguiti ogni volta che si usa il kit.

1. Controllo positivo: aggiungere una goccia di controllo positivo (M43b) in un cerchio del vetrino del test. Mescolare il lattice per Staphylococcus capovolgendolo delicatamente, aggiungerne 1 goccia nello stesso cerchio e mescolare con un bastoncino. Il contagocce non deve toccare il controllo positivo. Far oscillare delicatamente il vetrino. Entro 2 minuti deve essere visibile un'agglutinazione, che indica un risultato positivo. Se non si vede agglutinazione, va usato un kit nuovo.
2. Controllo negativo: mescolare il lattice per Staphylococcus capovolgendolo delicatamente e aggiungerne 1 goccia in un cerchio del vetrino del test. Con uno stafilococco noto negativo alla coagulasi/proteina A, per esempio S. epidermidis, prelevare una colonia fresca di 18-24 ore di crescita ed emulsionarla nella goccia di reagente al lattice sul vetrino. Far oscillare delicatamente il vetrino per 2 minuti. Non deve esserci agglutinazione.

Smaltire secondo le norme locali, nazionali o regionali.