MRS Agar

Descrizione

La qualità dei peptoni, insieme agli estratti di carne e di lievito, riunisce tutti i fattori di crescita necessari che fanno del terreno MRS uno dei migliori terreni per la coltivazione dei lattobacilli.

Poiché la selettività di questo terreno è bassa e i contaminanti tendono a crescere, per aumentare la selettività si raccomanda il trapianto in un terreno solido (a doppio strato) e poi in brodo. In molti casi la crescita è favorita dall'incubazione in atmosfera arricchita di CO₂.

Il terreno MRS è particolarmente raccomandato per la conta e il mantenimento dei lattobacilli, sia con la tecnica MPN in brodo sia con l'inoculo su piastra, ricoperta poi con un secondo strato di terreno fuso. Questa tecnica evita la necessità di un'atmosfera arricchita di CO₂.

Tecnica

Raccogliere, diluire e preparare campioni e volumi secondo le specifiche, le direttive, le norme ufficiali e/o i risultati attesi.

Seminare la piastra per striscio o con il metodo a spirale. Incubare le piastre non capovolte, in atmosfera di CO₂, a 30 ± 1 °C per 72 ± 3 h.

(A seconda del campione, delle specifiche, ecc., possono essere necessari tempi di incubazione più lunghi di quelli indicati sopra o temperature di incubazione diverse. Questo terreno si può inoculare direttamente o dopo un brodo di arricchimento come MRS broth, incubato in condizioni di microaerofilia per favorire l'arricchimento dei lattobacilli.)

Dopo l'incubazione, contare tutte le colonie comparse sulla superficie dell'agar.

Ogni laboratorio deve valutare i risultati secondo le proprie specifiche.

Calcolare la carica microbica totale per mL di campione moltiplicando il numero medio di colonie per piastra per l'inverso del fattore di diluizione, se è stato seminato un campione diluito. Riportare i risultati come unità formanti colonia (UFC) per mL o per g, insieme al tempo e alla temperatura di incubazione.

LC-4109 e LC-4691, provette e flaconi

Fondere il terreno contenuto nelle provette (LC-4109) o nei flaconi (LC-4691) a bagnomaria o nel forno a microonde, evitando di surriscaldarlo, prima di versarlo in piastre di Petri una volta raffreddato a temperatura ambiente.

Una volta solidificato su una superficie piana, seminare la piastra per striscio o con il metodo a spirale. Incubare le piastre non capovolte, in aerobiosi, a 30 ± 1 °C per 72 ± 3 h.

(A seconda del campione, delle specifiche, ecc., possono essere necessari tempi di incubazione più lunghi di quelli indicati sopra o temperature di incubazione diverse; un'umidità adeguata e la presenza di anidride carbonica stimolano le colture. Questo terreno si può inoculare direttamente o dopo un brodo di arricchimento come MRS broth, incubato in condizioni di microaerofilia per favorire l'arricchimento dei lattobacilli.)

Nota (LC-4691): i terreni solidi si possono fondere in modi diversi: autoclave, bagnomaria e, se il cliente lo ritiene opportuno, anche il forno a microonde. Se si sceglie il forno a microonde, bisogna prendere alcune misure di sicurezza per evitare la rottura dei contenitori, come allentare il tappo a vite e mettere il flacone o la provetta a bagnomaria nel forno a microonde. La temperatura e il tempo di fusione dipendono dalla forma del contenitore, dal volume di terreno e dalla fonte di calore. Evitare il surriscaldamento e i riscaldamenti prolungati.

LC-4691, flaconi

PROTEGGERE SEMPRE DALLA LUCE. EVITARE L'ESPOSIZIONE PROLUNGATA ALLA LUCE.

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Inoculo: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10³-10⁴ (selettività qualitativa).

Metodologia analitica secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018; A2:2020.

Anaerobiosi. Incubazione a 30 ± 1 °C per 72 ± 3 h.

Controllo microbiologico secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018.

LC-4109 e LC-4691: controllo microbiologico

Fusione - piastre per inclusione - inoculo: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10³-10⁴ UFC (selettività qualitativa).

Incubazione in microaerofilia a 30 ± 1 °C per 72 ± 3 h.

Controllo di sterilità

Incubazione 48 h a 30-35 °C e 48 h a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.

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