DNA polimerasi
SNP Pol DNA Polymerase
DNA polimerasi hot start ad alta discriminazione per PCR allele-specifica e analisi di SNP
- Codice
- M3009
- Categoria
- DNA polimerasi
- Formati
- 2 formati
- Produttore
Variante ingegnerizzata e ricombinante di DNA polimerasi che non estende i primer con un mismatch all'estremità 3': l'amplificazione avviene solo sull'allele perfettamente appaiato. Basta progettare un primer standard il cui nucleotide 3' cade sulla mutazione puntiforme per distinguere wild type e mutante senza sequenziamento. Un aptamero inibisce reversibilmente l'enzima sotto i 55 °C e previene le amplificazioni aspecifiche durante l'allestimento.
Caratteristiche principali
Discriminazione allelica
Rileva meno di 10 copie mutate su oltre 10.000 copie wild type, con discriminazione fino al 100% nella PCR allele-specifica.
Hot start con aptamero
Inibizione reversibile sotto i 55 °C; si consigliano primer con temperatura di annealing superiore a 57 °C.
PCR diretta da cellule
Cellule animali ed E. coli (50-500 cellule) si aggiungono direttamente alla reazione, senza lisi separata né digestione con proteinasi K.
Fedeltà paragonabile alla Taq
Il tasso di errore è comparabile a quello della Taq wild type.
Applicazioni
- PCR allele-specifica (ASA/AS-PCR) e genotipizzazione di SNP
- Estensione allele-specifica del primer (AS-PEX)
- PCR metilazione-specifica (MSP) dopo trattamento con bisolfito, anche su singoli siti CpG
- Tipizzazione HLA
- Verifica di prodotti di editing CRISPR/Cas9
- Conferma e quantificazione di mutazioni individuate per sequenziamento o NGS
- Real-time PCR con coloranti intercalanti
- Minisequenziamento
Specifiche tecniche
| Concentrazione | 5 U/µL |
|---|---|
| Fornito con | Tampone di reazione 10x ottimizzato |
| Attività | Polimerasi 5'-3'; nessuna attività esonucleasica 5'-3' o 3'-5' |
| Hot start | Inibizione mediante aptamero, reversibile sopra i 55 °C |
| Velocità di estensione | 0,5-1 kb/min a 72 °C |
| Lunghezza dell'amplicone | Consigliati 60-200 bp; oltre 500 bp può servire Mg2+ aggiuntivo (0,5-1,5 mM) |
| Compatibilità | Coloranti intercalanti aspecifici in real-time PCR; non adatta alle sonde di idrolisi |
| Definizione di unità | 1 U incorpora 10 nmol di dNTP in materiale insolubile in acido in 30 minuti a 72 °C |
| Conservazione | -20 °C; fino a 9 mesi a +2/+8 °C |
| Spedizione | Su ghiaccio; piena attività per almeno 2 settimane a +15/+25 °C |
| Controllo qualità | Test ASA sullo SNP genomico rs72921001 in DNA di cellule HeLa; attività regolata su stampo artificiale; concentrazione determinata con colorazione proteica; nessuna contaminazione rilevata |
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