SPS Agar (Sulfite Polymyxin Sulfadiazine)

Descrizione

I substrati nutritivi costituiti dal triptone e dall'estratto di lievito sono integrati dal polisorbato, che permette anche il recupero delle cellule più delicate. Le condizioni anaerobiche sono migliorate dal tioglicolato, che permette l'uso del terreno in piastra.

Il sistema differenziale è costituito da solfito di sodio e citrato ferrico, che permette la rilevazione degli organismi solfito-riduttori, che formano colonie nere per il precipitato di solfuro ferroso.

Tecnica

Raccogliere, diluire e preparare campioni e volumi secondo le specifiche, le direttive, le norme ufficiali e/o i risultati attesi.

Fondere il terreno contenuto nelle provette a bagnomaria o nel forno a microonde, evitando di surriscaldarlo.

Aggiungere il campione direttamente nella provetta dopo aver preparato una serie di diluizioni, oppure per infissione con l'ago.

Incubare la provetta in condizioni anaerobiche a 44 ± 1 °C per 24-48 h.

(A seconda del campione, delle specifiche, ecc., possono essere necessari tempi di incubazione più lunghi di quelli indicati sopra o temperature di incubazione diverse.)

Dopo l'incubazione, contare tutte le colonie comparse nell'agar, con un precipitato nero.

Ogni laboratorio deve valutare i risultati secondo le proprie specifiche.

L'isolamento presuntivo di Clostridium sp. va confermato con ulteriori prove microbiologiche e biochimiche.

Calcolare la carica microbica totale per mL di campione moltiplicando il numero medio di colonie per piastra per l'inverso del fattore di diluizione, se è stato seminato un campione diluito. Riportare i risultati come unità formanti colonia (UFC) per mL o per g, insieme al tempo e alla temperatura di incubazione.

Poiché il terreno non è estremamente selettivo, è consigliabile verificare le colonie nere controllando che siano organismi Gram-positivi sporigeni, immobili e incapaci di ridurre i nitrati a nitriti.

La maggior parte dei clostridi è solfito-riduttrice. Tra questi ci sono C. perfringens e C. botulinum, che insieme a C. bifermentans sono le specie più spesso coinvolte nelle intossicazioni alimentari.

LC-4712, piastre da 55 mm per filtrazione

Terreno solido per la rilevazione di Clostridium perfringens in campioni di acque e alimenti.

La tecnica abituale per l'uso di questo terreno è la seguente:

Raccogliere, diluire e preparare campioni e volumi da filtrare secondo le specifiche, le direttive, le norme ufficiali e/o i risultati attesi.

Filtrare il campione su una membrana con pori da 0,45 µm e porla sulla superficie dell'agar SPS.

Incubare le piastre in anaerobiosi a 35 ± 2 °C per 24-48 h. Se si desidera un terreno di coltura più selettivo, incubare a 44 ± 1 °C.

(A seconda del campione, delle specifiche, ecc., possono essere necessari tempi di incubazione più lunghi di quelli indicati sopra o temperature di incubazione diverse.)

Dopo l'incubazione, contare tutte le colonie comparse sulla superficie della membrana.

Dopo l'incubazione, contare le colonie con un precipitato nero di solfuro di ferro.

Il 90 % delle colonie nere che si formano si può di solito attribuire a Clostridium perfringens.

Poiché il terreno non è estremamente selettivo, è consigliabile verificare le colonie nere controllando che siano organismi Gram-positivi sporigeni, immobili e incapaci di ridurre i nitrati a nitriti.

La maggior parte dei clostridi è solfito-riduttrice. Tra questi ci sono C. perfringens e C. botulinum, che insieme a C. bifermentans sono le specie più spesso coinvolte nelle intossicazioni alimentari.

LC-4712, piastre da 55 mm per filtrazione

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

LC-4255: inoculare per infissione.

LC-4712: filtrazione su membrana / intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ UFC per la selettività.

Anaerobiosi. Incubazione a 35 ± 2,5 °C, lettura dopo 24-48 ore.

Controllo di sterilità

Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.

• ANGELOTTI, HALL, FOSTER & LEWIS (1962) Quantisation of Clostridium perfringens in foods. Appl. Microbiol., 10:193.
• DOWNES, F.P. & K. ITO (2001) Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 4th ed., APHA. Washington.
• F.D.A. (1998) Bacteriological Analytical Manual. 8th ed. Rev. A., AOAC International. Gaithersburg. MD.
• ISO 11133:2014/Amd 1:2018. Microbiology of food, animal feed and water. Preparation, production, storage and performance testing of culture media.
• MOSSEL, D.A.A. (1959) Enumeration of sulfite-reducing bacteria occurring in foods. J. Sci. Food Agric. 19:662.