Standard Methods Agar (PCA) ISO/APHA

Descrizione

La formulazione originale dell'agar standardizzato per la microbiologia lattiero-casearia è stata modificata per evitare l'aggiunta di latte. Questa nuova composizione permette la crescita della maggior parte dei microrganismi senza altre aggiunte.

La formulazione di questo terreno è equivalente a quella descritta dagli "Standard Methods for the Examination of Dairy Products", al "Tryptone Glucose Yeast Agar" della USP, a quella della "Deutsche Landwirtschaft" e al Plate Count Agar di APHA, ISO e AOAC (LC-5112: di APHA e AOAC). È il terreno di elezione per la conta su piastra di qualsiasi tipo di campione.

Tecnica

Il tempo e la temperatura di incubazione dipendono dal tipo di microrganismo studiato. Per una conta generale degli aerobi, incubare per 3 giorni a 30 °C, con letture dopo 24, 48 e 72 ore.

Dopo l'incubazione, contare tutte le colonie comparse sulla superficie dell'agar.

Ogni laboratorio deve valutare i risultati secondo le proprie specifiche.

LC-4706, piastre da 55 mm per filtrazione

Inoculare con il metodo di filtrazione su membrana (MF).

Il tempo e la temperatura di incubazione dipendono dal tipo di microrganismo studiato. Per una conta generale degli aerobi, incubare per 3 giorni a 30 °C, con letture dopo 48 e 72 ore.

Dopo l'incubazione, contare tutte le colonie comparse sulla superficie dell'agar.

Ogni laboratorio deve valutare i risultati secondo le proprie specifiche.

LC-5112 e LC-5115, flaconi

Per l'uso, il contenuto del flacone va versato in piastre. Il terreno di coltura va fuso secondo le istruzioni del produttore, a bagnomaria o nel forno a microonde. Non applicare mai calore diretto per fondere un terreno. Le temperature e i tempi di fusione dipendono dalla forma del contenitore, dal volume di terreno e dalla fonte di calore. Prima di fondere qualsiasi terreno, allentare il tappo a vite del contenitore per evitare che si rompa. Il terreno va fuso una sola volta e poi usato. I terreni con agar non vanno fusi più volte, perché le loro caratteristiche cambiano a ogni nuova fusione. Il surriscaldamento va evitato quanto il riscaldamento prolungato, soprattutto per i terreni a pH acido o alcalino. Una volta fuso il terreno, versare le piastre con tecniche asettiche. Per l'inoculo seguire i metodi standard del laboratorio o le norme applicabili: metodo di semina a spirale, semina per striscio, metodi ecometrici, serie di diluizioni, spatolamento, ecc.

Preparare diluizioni seriali decimali del campione, prelevare da ogni diluizione 1 mL in aliquote doppie e porle in piastre di Petri sterili. Versare in ogni piastra circa 20 mL di terreno sterile raffreddato (a circa 45 °C). Mescolare delicatamente ruotando la piastra a forma di 8. Lasciare solidificare le piastre senza muoverle e incubarle capovolte. Il tempo e la temperatura di incubazione dipendono dal tipo di microrganismo studiato. Per una conta generale degli aerobi, incubare per 3 giorni a 30 °C, con letture dopo 24, 48 e 72 ore.

Il metodo di conta in piastra proposto dall'APHA consiste nel versare l'agar fuso a 50 °C su piastre che contengono i campioni diluiti (tecnica per inclusione). La conta finale si esegue dopo 48 ore di incubazione a 32-35 °C.

Per i microrganismi con altre esigenze di temperatura sono state suggerite le incubazioni seguenti: 2 giorni a 32-35 °C, 2-3 giorni a 45 °C, 2 giorni a 55 °C, 3-5 giorni a 20 °C, 7-10 giorni a 5-7 °C.

Le diluizioni dei campioni si preparano, secondo la loro natura, con soluzione di Ringer 1/4, Buffered Peptone Water o Maximum Recovery Diluent.

Il metodo di conta per inclusione è preferito alla tecnica di spatolamento, perché dà conte più alte.

Tuttavia, quest'ultima facilita l'isolamento e il trapianto delle colonie.

LC-4706, piastre da 55 mm per filtrazione

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Inoculo (LC-903): intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività).

Fusione - piastre per inclusione - inoculo (LC-5112, LC-5115): intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ UFC (selettività).

Controllo microbiologico secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018.

Aerobiosi. Incubazione a 30 ± 1 °C, lettura a 24-48-72 h.

LC-4706, piastre da 55 mm per filtrazione

Filtrazione su membrana: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività).

Controllo microbiologico secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018.

Metodologia analitica secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018; A2:2020.

Aerobiosi. Incubazione a 30 ± 1 °C, lettura a 72 ± 3 h.

Ps. fluorescens ATCC 13525 (10 giorni / 6,5 ± 1 °C) secondo ISO 17410.

Controllo di sterilità

Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.

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