T.S.C. Agar Base (Tryptose Sulfite Cycloserine) ISO

Descrizione

La cicloserina non tollera temperature superiori a 100 °C e la sua stabilità in soluzione è variabile. Per questo si consiglia di preparare il numero esatto di piastre che si useranno.

Tecnica

Per l'uso, il contenuto del flacone va versato in piastre. Il terreno di coltura va fuso secondo le istruzioni del produttore, a bagnomaria (100 °C) o nel forno a microonde. Aggiungere la cicloserina alla concentrazione di 400 mg/L prima di versare il terreno di coltura nelle piastre o nelle provette.

Non applicare mai calore diretto per fondere un terreno. Le temperature e i tempi di fusione dipendono dalla forma del contenitore, dal volume di terreno e dalla fonte di calore. Prima di fondere qualsiasi terreno, allentare il tappo a vite del contenitore per evitare che si rompa. Il terreno va fuso una sola volta e poi usato. I terreni con agar non vanno fusi più volte, perché le loro caratteristiche cambiano a ogni nuova fusione. Il surriscaldamento va evitato quanto il riscaldamento prolungato, soprattutto per i terreni a pH acido o alcalino. Una volta fuso il terreno, versare le piastre con tecniche asettiche.

Per l'inoculo seguire i metodi standard del laboratorio o le norme applicabili: metodo di semina a spirale, semina per striscio, metodi ecometrici, serie di diluizioni, spatolamento, ecc.

La procedura standard raccomanda l'inoculo in superficie dei campioni o delle loro diluizioni e, una volta assorbiti, la colata di un secondo strato come sigillo per l'anaerobiosi. Dopo l'incubazione a 44 ± 1 °C per 21 ± 3 h, contare le colonie nere che compaiono sulla piastra.

Nota: i terreni solidi si possono fondere in modi diversi: autoclave, bagnomaria e, se il cliente lo ritiene opportuno, anche il forno a microonde. Se si sceglie il forno a microonde, bisogna prendere alcune misure di sicurezza per evitare la rottura dei contenitori, come allentare il tappo a vite e mettere il flacone o la provetta a bagnomaria nel forno a microonde. La temperatura e il tempo di fusione dipendono dalla forma del contenitore, dal volume di terreno e dalla fonte di calore. Evitare il surriscaldamento e i riscaldamenti prolungati.

LC-4661, flaconi da 250 mL

Le tre caratteristiche differenziali sono la riduzione del solfito, la crescita a 46 °C e la resistenza alla cicloserina.

Si può preparare una soluzione di cicloserina in tampone fosfato a pH 8,0 (fosfato dipotassico 16,73 g/L e fosfato monopotassico 0,52 g/L) che, se conservata in frigorifero, si può usare per circa 5 giorni.

La procedura standard raccomanda l'inoculo in superficie dei campioni o delle loro diluizioni e, una volta assorbiti, la colata di un secondo strato come sigillo per l'anaerobiosi. Dopo l'incubazione a 44 ± 1 °C per 23 ± 1 h, contare le colonie nere che compaiono sulla piastra.

Nota: un metodo alternativo è l'uso di TSC Base Medium + Selective Supplement MUP (25 mg) / 200 mL di terreno. Questo reagente permette di identificare Cl. perfringens dalla sua fluorescenza.

LC-4728, piastre per filtrazione su membrana

Le tre caratteristiche differenziali sono la riduzione del solfito, la crescita a 46 °C e la resistenza alla cicloserina.

Raccogliere, diluire e preparare campioni e volumi da filtrare secondo le specifiche, le direttive, le norme ufficiali e/o i risultati attesi.

Filtrare il campione su una membrana con pori da 0,45 µm e porla sulla superficie dell'agar.

In alternativa, si può usare uno strato sottile di TSC agar fuso o di agar come copertura sulla membrana.

Incubare le piastre in anaerobiosi a 44 ± 1 °C per 21 ± 3 h.

(A seconda del campione, delle specifiche, ecc., possono essere necessari tempi di incubazione più lunghi di quelli indicati sopra o temperature di incubazione diverse.)

Dopo l'incubazione, contare le colonie con un precipitato nero di solfuro di ferro.

Le colonie caratteristiche vanno confermate come C. perfringens con ulteriori prove microbiologiche o biochimiche.

Aggiungere 1 fiala di D-Cycloserine Selective Supplement (40 mg).

LC-4728, piastre per filtrazione su membrana

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Prima dell'aggiunta della cicloserina; controllo qualità secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018.

Fondere il terreno - preparare le piastre - semina a spirale: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività).

Metodologia analitica secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018; A2:2020.

Anaerobiosi. Incubazione a 44 ± 1 °C per 21 ± 3 h.

Controllo microbiologico secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018.

Un doppio strato di TSC agar favorisce l'osservazione dell'annerimento dei ceppi H₂S (+).

LC-4661, flaconi da 250 mL: controllo fisico-chimico

LC-4728, piastre per filtrazione su membrana: controllo qualità

Filtrazione su membrana / intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ UFC (selettività) / ≥ 10³ UFC (specificità).

Controllo microbiologico secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018.

Metodologia analitica secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018; A2:2020.

Anaerobiosi. Incubazione a 44 ± 1 °C per 21 ± 3 h.

Un doppio strato di TSC agar favorisce l'osservazione dell'annerimento dei ceppi H₂S (+).

Controllo di sterilità

Incubazione 48 h a 30-35 °C e 48 h a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.

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