Violet Red Bile Agar with Glucose (VRBG) EP/USP/ISO

Tecnica

Per l'inoculo delle piastre seguire i metodi standard del laboratorio o le norme applicabili (metodo di semina a spirale, metodi ecometrici, semina per striscio, serie di diluizioni, spatolamento con spatola di Drigalski, ecc.).

Violet Red Bile Dextrose Agar è molto usato nell'analisi di alimenti, medicinali e cosmetici. È particolarmente indicato per il recupero dei batteri danneggiati durante la preparazione. In questi casi si raccomanda un arricchimento progressivo in TSB e poi in EE Broth. La coltura arricchita si può inoculare in provette o su piastre di Violet Red Bile Dextrose Agar. Per la conta degli enterobatteri, seguire la tecnica descritta per Violet Red Bile Agar.

I risultati si possono leggere dopo 24 ore di incubazione a 37 ± 1 °C. Le colonie di enterobatteri sono di colore porpora intenso, circondate da una zona più chiara. Se si sviluppano colonie di enterococchi, sono piccole e di colore rosa.

Nota: a seconda del campione e delle specifiche possono essere necessari tempi di incubazione più lunghi di quelli indicati sopra o temperature di incubazione diverse.

LC-911, piastre da 90 mm

I risultati si possono leggere dopo 24 ore di incubazione a 35 ± 2,0 °C. Le colonie di enterobatteri sono di colore porpora intenso, circondate da una zona più chiara. Se si sviluppano colonie di enterococchi, sono piccole e di colore rosa.

LC-4524, piastre a contatto

Le piastre a contatto si usano nel controllo microbiologico della disinfezione e della pulizia delle superfici. Agiscono contemporaneamente da campionatore e da terreno di coltura per l'incubazione, senza bisogno di altri passaggi intermedi.

Le piastre hanno una forma adatta a questa funzione e si possono usare con diversi terreni di coltura, a seconda del tipo di microrganismo da controllare. In media le piastre offrono una superficie di contatto di circa 25 cm².

Per l'uso, togliere il coperchio e premere delicatamente il terreno di coltura sulla superficie da controllare, assicurando il contatto tra le due superfici. Si toglie la piastra a contatto e la si chiude con il coperchio, per evitare la contaminazione dall'aria. Si consiglia di fissare il coperchio con nastro adesivo e di etichettare il fondo con i dati del campionamento (luogo, data e ora).

Se le superfici da campionare sono ruvide, le piastre a contatto non fanno un buon contatto, anche aumentando la pressione. In questi casi si consiglia di delimitare un'area di 25 cm², strofinarla energicamente con un tampone sterile bagnato e poi strofinare il tampone sulla piastra a contatto.

Se si verifica l'efficacia di un processo di pulizia o di disinfezione, le piastre a contatto vanno usate entro due ore dalla fine del processo, assicurandosi che la superficie da campionare sia asciutta. Si consiglia di includere sempre controlli positivi, campionando l'area prima della disinfezione o le zone sporche accanto all'area disinfettata.

Il tecnico stabilisce la frequenza del campionamento e della disinfezione secondo criteri di prestazione. Applicare l'agar direttamente sulla superficie da monitorare, distribuendo la pressione su tutta la piastra per 10 secondi. Pulire la superficie in cui è stato raccolto il campione, per togliere ogni traccia di agar.

Le piastre inoculate si incubano a 35 ± 2 °C per 24 ± 2 h.

Nota: le piastre a contatto si usano per monitorare la contaminazione microbiologica delle superfici e dell'aria in camere bianche, isolatori, RABS, industrie alimentari e ospedali.

LC-4670 e LC-5158, flaconi

Questo terreno si può usare come terreno presuntivo per E. coli (con reazione fluorescente) se prima della sterilizzazione si aggiunge MUG.

Raccogliere, diluire e preparare campioni e volumi secondo le specifiche, le direttive, le norme ufficiali e/o i risultati attesi.

Fondere il terreno contenuto nei flaconi a bagnomaria (100 °C) o nel forno a microonde, evitando di surriscaldarlo, prima di versarlo in piastre di Petri una volta raffreddato a temperatura ambiente.

Una volta solidificato su una superficie piana, seminare le piastre per striscio o con il metodo a spirale. Incubare le piastre non capovolte, in aerobiosi, a 35 ± 2,0 °C per 24 h.

(A seconda del campione, delle specifiche, ecc., possono essere necessari tempi di incubazione più lunghi di quelli indicati sopra, metodi di inoculo diversi o temperature di incubazione diverse. Questo terreno si può inoculare direttamente o dopo un qualsiasi brodo di arricchimento.)

Dopo l'incubazione, contare tutte le colonie rosso-violette comparse sulla superficie dell'agar, con un alone rosso-violetto dovuto alla precipitazione dei sali biliari.

L'isolamento presuntivo di E. coli o dei coliformi va confermato con ulteriori prove microbiologiche e biochimiche.

Calcolare la carica microbica totale per mL di campione moltiplicando il numero medio di colonie per piastra per l'inverso del fattore di diluizione, se è stato seminato un campione diluito. Riportare i risultati come unità formanti colonia (UFC) per mL o per g, insieme al tempo e alla temperatura di incubazione, che permettono di distinguere i coliformi totali dai coliformi fecali.

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Controllo microbiologico secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018.

Metodologia analitica secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018; A2:2020.

Aerobiosi. Incubazione: 30-35 °C, lettura a 24 h (Farmacopea Europea) / 37 ± 1 °C, lettura a 24 h (ISO).

Nota: risultati ATCC 8739/6538/9027 (30-35 °C) e ATCC 8739/25922/19433/14028 (37 °C).

LC-911, LC-4524, LC-4670 e LC-5158: controllo microbiologico

LC-911 e LC-4524: inoculare con 10-100 UFC secondo le farmacopee armonizzate o con 10⁴-10⁶ UFC per la selettività.

LC-4670 e LC-5158: fusione - piastre per inclusione - inoculo: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ UFC (selettività).

Controllo microbiologico secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018.

Aerobiosi. Incubazione: 30-35 °C, lettura a 24 h (Farmacopea Europea) / 37 ± 1 °C, lettura a 24 h (ISO).

Nota (LC-911, LC-4670 e LC-5158): risultati ATCC 8739/6538/9027 a 30-35 °C, gli altri a 37 °C.

Controllo di sterilità

Incubazione 48 h a 30-35 °C e 48 h a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.

• EUROPEAN PHARMACOPOEIA 8.0 (2014) 8th ed. § 2.6.13. Microbiological examination of non-sterile products: Test for specified microorganisms. Harmonised Method. EDQM. Council of Europe. Strasbourg.
• ISO 21528-1:2004. Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal methods for the detection and enumeration of Enterobacteriaceae - Part 1: Detection and enumeration by MPN technique with pre-enrichment.
• ISO 11133:2014/Amd 1:2018. Microbiology of food, animal feed and water. Preparation, production, storage and performance testing of culture media.
• MOSSEL, D.A.A. (1985) Media for Enterobacteriaceae. Int. J. Food Microbiol. 2:27-35.
• MOSSEL, D.A.A., H. MENGERINK & H.H. SCHOLTS (1962) Use a Modified MacConkey Agar Medium for the selective growth and enumeration of all Enterobacteriaceae. J. Bact. 84:381.
• MOSSEL, D.A.A., M. VISER & A.M.R. CORNELISSEN (1963) The examination of foods for Enterobacteriaceae using a test of the type generally adopted for the detection of salmonellae. J. Appl. Bact. 26:444-452.
• MOSSEL, D.A.A. & M.A. RATTO (1970) Rapid detection of sub-lethally impaired cells of Enterobacteriaceae in dried foods. Appl. Microbiol. 20:273-275.
• PASCUAL ANDERSON, Mª R. (1992) Microbiología Alimentaria. Díaz de Santos, S.A. Madrid.
• USP 33 - NF 28 (2011) <62> Microbiological examination of non-sterile products: Test for specified microorganisms. Harmonised Method. USP Corp. Inc. Rockville. MD. USA.