Violet Red Bile Agar With Glucose (VRBG) EP/USP/ISO

VRBG agar sta diventando il terreno preferito per le indagini su materie prime, alimenti trasformati e igiene degli impianti. Il gruppo delle Enterobacteriaceae comprende i batteri coliformi che fermentano il lattosio e specie che non fermentano il lattosio come Salmonella e Shigella.

Il digerito pancreatico di gelatina fornisce azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'estratto di lievito è la fonte di vitamine, in particolare del gruppo B. Il glucosio è il carboidrato fermentabile che fornisce carbonio ed energia. I microrganismi che fermentano il glucosio formano colonie rosse in presenza dell'indicatore di pH rosso neutro. I sali biliari e il cristal violetto inibiscono i batteri Gram-positivi. Il cloruro di sodio fornisce gli elettroliti essenziali per il trasporto e l'equilibrio osmotico. L'agar batteriologico è l'agente solidificante.

La Farmacopea Europea e la USP, al paragrafo 2.6.13, "Esame microbiologico dei prodotti non sterili: prove per microrganismi specificati", raccomandano questo terreno per la ricerca dei batteri Gram-negativi tolleranti alla bile nei prodotti.

La norma ISO 21528 propone VRBG Agar per la rilevazione e la conta delle Enterobacteriaceae.

Il metodo per inclusione sopprime la crescita dei batteri Gram-negativi non fermentanti, per le sue condizioni di semi-anaerobiosi. Anche la fermentazione del glucosio ne risulta stimolata, con la formazione di colonie rosso porpora ben visibili, circondate da un alone dello stesso colore. Si noti che i coliformi fermentano il glucosio e producono acido con o senza gas. Anche Klebsiella e Citrobacter, più resistenti al calore dei coliformi, crescono in questo terreno e possono indicare un difetto del processo di produzione (riscaldamento insufficiente).

Preparazione

Sospendere 41,5 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Raffreddare a 47-50 °C e distribuire subito. NON SURRISCALDARE.

Secondo la Farmacopea Europea

Per la prova dei microrganismi specificati (batteri Gram-negativi tolleranti alla bile) secondo la Farmacopea Europea:

1. Preparare il campione con una diluizione 1 a 10 di non meno di 1 g del prodotto in Trypticasein Soy Broth (TSB) (LC-1224) e incubare a 20-25 °C per 2-5 ore.
2. Per la prova di assenza, usare la diluizione preparata prima, corrispondente a 1 g del prodotto, per inoculare Mossel EE Broth (LC-1202) e incubare a 30-35 °C per 24-48 ore.
3. Trapiantare su piastre di Violet Red Bile Agar with Glucose (VRBG) e incubare a 30-35 °C per 18-24 ore. Il prodotto è conforme alla prova se non crescono colonie.
4. Per la prova quantitativa, usare la diluizione preparata prima, corrispondente a 0,1, 0,01 e 0,001 g del prodotto, per inoculare Mossel EE Broth (LC-1202) e incubare a 30-35 °C per 24-48 ore.
5. Trapiantare su piastre di Violet Red Bile Agar with Glucose (VRBG) e incubare a 30-35 °C per 18-24 ore.
6. La crescita di colonie costituisce un risultato positivo.

Secondo ISO 21528

Secondo ISO 21528, per la rilevazione e la conta delle Enterobacteriaceae:

1. Inoculare Buffered Peptone Water (BPW) (LC-1402) con la porzione da analizzare e incubare a 37 °C per 48 ore.
2. Inoculare Violet Red Bile Agar with Glucose (VRBG) con la coltura ottenuta dopo l'arricchimento in BPW, poi incubare a 37 °C per 24 ore.
3. Le colonie tipiche presuntive di Enterobacteriaceae dovrebbero essere trapiantate in un terreno non selettivo e confermate con le prove di fermentazione del glucosio e di presenza dell'ossidasi.

• D.A. Mossel, (1985) Media for Enterobacteriaceae (Inst. J. Food Microbiol 2:27).
• ISO 21528. Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal methods for the detection and enumeration of Enterobacteriaceae.
• ISO 7402 Microbiology - General guidance for the enumeration of Enterobacteriaceae without resuscitation - MPN technique and colony-count technique.
• ISO 8523 Microbiology - General guidance for the detection of Enterobacteriaceae with pre-enrichment.
• European Pharmacopoeia 9.3