Terreni pronti all'uso
Violet Red Bile Lactose Agar (VRBL) ISO
Terreno per la rilevazione e la conta dei coliformi nel latte e negli altri prodotti lattiero-caseari, secondo le norme APHA e ICMSF, FIL-IDF e ISO.
- Codice
- LC-910
- Categoria
- Terreni pronti all'uso
- Formati
- 4 formati
- Controllo qualità ISO 17025
- Sì
- Norme
- ISO 4832
Violet Red Bile Agar corrisponde alla formulazione classica dei terreni standardizzati per lo screening dei coliformi nel latte e negli altri prodotti lattiero-caseari. Questo terreno è stato adottato per la conta dei coliformi e per la differenziazione tra gli organismi che fermentano il lattosio e quelli che non lo fermentano, grazie al suo contenuto di cristal violetto e di sali biliari, le cui proprietà inibenti o selettive sono state ampiamente confermate.
Caratteristiche principali
Conta selettiva dei coliformi.
Prodotti lattiero-caseari, alimenti, acque.
ISO 4832.
Descrizione e tecnica
Tecnica
Per l'inoculo delle piastre seguire i metodi standard del laboratorio o le norme applicabili (metodo di semina a spirale, metodi ecometrici, semina per striscio, serie di diluizioni, spatolamento con spatola di Drigalski, ecc.).
Le piastre si leggono dopo 24 ore di incubazione a 30 °C.
La dimensione delle colonie va da 2 a 5 mm, a seconda della quantità per piastra. Se si sviluppano enterococchi, appaiono piccoli e di colore rosa. Gli enterobatteri che fermentano il lattosio assumono un colore rosso scuro con una zona chiara intorno, mentre quelli che non fermentano il lattosio formano colonie incolori.
LC-4532, piastre a contatto
Le piastre a contatto si usano nel controllo microbiologico della disinfezione e della pulizia delle superfici. Agiscono contemporaneamente da campionatore e da terreno di coltura per l'incubazione, senza bisogno di altri passaggi intermedi.
Le piastre hanno una forma adatta a questa funzione e si possono usare con diversi terreni di coltura, a seconda del tipo di microrganismo da controllare. In media le piastre offrono una superficie di contatto di circa 25 cm².
Per l'uso, togliere il coperchio e premere delicatamente il terreno di coltura sulla superficie da controllare, assicurando il contatto tra le due superfici. Si toglie la piastra a contatto e la si chiude con il coperchio, per evitare la contaminazione dall'aria. Si consiglia di fissare il coperchio con nastro adesivo e di etichettare il fondo con i dati del campionamento (luogo, data e ora).
Se le superfici da campionare sono ruvide, le piastre a contatto non fanno un buon contatto, anche aumentando la pressione. In questi casi si consiglia di delimitare un'area di 25 cm², strofinarla energicamente con un tampone sterile bagnato e poi strofinare il tampone sulla piastra a contatto.
Se si verifica l'efficacia di un processo di pulizia o di disinfezione, le piastre a contatto vanno usate entro due ore dalla fine del processo, assicurandosi che la superficie da campionare sia asciutta. Si consiglia di includere sempre controlli positivi, campionando l'area prima della disinfezione o le zone sporche accanto all'area disinfettata.
Il tecnico stabilisce la frequenza del campionamento e della disinfezione secondo criteri di prestazione. Applicare l'agar direttamente sulla superficie da monitorare, distribuendo la pressione su tutta la piastra per 10 secondi. Pulire la superficie in cui è stato raccolto il campione, per togliere ogni traccia di agar.
Le piastre inoculate si incubano a 30 ± 1 °C per 18-24 h.
Nota: le piastre a contatto si usano per monitorare la contaminazione microbiologica delle superfici e dell'aria in camere bianche, isolatori, RABS, industrie alimentari e ospedali. Il doppio/triplo involucro irradiato garantisce che la confezione stessa non contamini l'ambiente, perché il primo involucro si toglie appena prima di entrare nell'area pulita.
LC-4682 e LC-5161, flaconi
Per l'uso, il contenuto del flacone va versato in piastre. Il terreno di coltura va fuso secondo le istruzioni del produttore, a bagnomaria (100 °C) o nel forno a microonde. Non applicare mai calore diretto per fondere un terreno. Le temperature e i tempi di fusione dipendono dalla forma del contenitore, dal volume di terreno e dalla fonte di calore. Prima di fondere qualsiasi terreno, allentare il tappo a vite del contenitore per evitare che si rompa. Il terreno va fuso una sola volta e poi usato. I terreni con agar non vanno fusi più volte, perché le loro caratteristiche cambiano a ogni nuova fusione. Il surriscaldamento va evitato quanto il riscaldamento prolungato, soprattutto per i terreni a pH acido o alcalino.
Una volta fuso il terreno, versare le piastre con tecniche asettiche. Per l'inoculo seguire i metodi standard del laboratorio o le norme applicabili: metodo di semina a spirale, semina per striscio, metodi ecometrici, serie di diluizioni, spatolamento, ecc.
La procedura raccomandata è l'inoculo direttamente nelle piastre di Petri, con l'agar fuso raffreddato a 45-47 °C. Le piastre si possono leggere dopo 24 ore di incubazione a 30 °C.
La dimensione delle colonie va da 2 a 5 mm, a seconda della quantità per piastra. Se si sviluppano enterococchi, appaiono piccoli e di colore rosa. Gli enterobatteri che fermentano il lattosio assumono un colore rosso scuro con una zona chiara intorno, mentre quelli che non fermentano il lattosio formano colonie incolori.
Presentazione
| Codice | Presentazione | Riempimento | Confezione |
|---|---|---|---|
| LC-910 | 20 piastre pronte da 90 mm | 21 ± 2 mL | 1 scatola con 2 confezioni da 10 piastre. Cellophane singolo. |
| LC-4532 | 30 piastre a contatto, doppio involucro | 15 ± 2 mL | 1 scatola con 5 blister (base in alluminio, PVDC e busta) da 6 piastre a contatto. |
| LC-4682 | 10 flaconi pronti da 250 mL | 200 ± 5 mL | 1 scatola con 10 flaconi da 250 mL. Tappo metallico non perforabile. |
| LC-5161 | 10 flaconi pronti da 125 mL | 100 ± 3 mL | 1 scatola con 10 flaconi da 125 mL. Tappo metallico non perforabile. |
Composizione
| Componente | g/L |
|---|---|
| Estratto di lievito | 3,000 |
| Peptone di carne | 7,000 |
| Miscela di sali biliari | 1,500 |
| Lattosio | 10,000 |
| Cloruro di sodio | 5,000 |
| Rosso neutro | 0,030 |
| Cristal violetto | 0,002 |
| Agar | 13,000; LC-4532: 15,0 |
LC-4682 e LC-5161, flaconi
| Componente | g/L |
|---|---|
| Estratto di lievito | 3,000 |
| Peptone | 7,000 |
| Sali biliari n. 3 | 1,500 |
| Lattosio | 10,00 |
| Cloruro di sodio | 5,000 |
| Rosso neutro | 0,030 |
| Cristal violetto | 0,002 |
| Agar | 13,000 |
Controllo qualità
Controllo fisico-chimico
| Colore | Rosa-violetto |
|---|---|
| pH | 7,4 ± 0,2 a 25 °C |
Controllo microbiologico
Semina a spirale (LC-4532: inoculo): intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ UFC (selettività).
Aerobiosi. Incubazione a 30 ± 1 °C per 18-24 h.
| Microrganismo | Crescita |
|---|---|
| Enterococcus faecalisATCC 19433, WDCM 00009 | Inibito |
| Ps. aeruginosaATCC 9027, WDCM 00026 | Colonie da incolori a beige |
| Salmonella typhimuriumATCC 14028, WDCM 00031 | Colonie da incolori a beige |
| Escherichia coliATCC 8739, WDCM 00012 | Buona (≥ 50 %) - colonie rosso porpora |
| Escherichia coliATCC 25922, WDCM 00013 | Buona (≥ 50 %) - colonie rosso porpora |
LC-4682 e LC-5161, flaconi: controllo microbiologico
Fusione - piastre per inclusione - inoculo: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ UFC (selettività).
Aerobiosi. Incubazione a 30 ± 1 °C per 18-24 h.
| Microrganismo | Crescita |
|---|---|
| Enterococcus faecalisATCC 19433, WDCM 00009 | Inibito |
| Escherichia coliATCC 8739, WDCM 00012 | Buona (≥ 50 %) - colonie rosso porpora |
| Escherichia coliATCC 25922, WDCM 00013 | Buona (≥ 50 %) - colonie rosso porpora |
| Ps. aeruginosaATCC 27853, WDCM 00025 | Buona - colonie incolori |
| Salmonella typhimuriumATCC 14028, WDCM 00031 | Buona - colonie incolori |
Controllo di sterilità
Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.
Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.
Bibliografia
- DOWNES, F.P. & K. ITO (2001). Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Food. 4th ed. APHA, Washington. DC.
- FIL-IDF. (1998) Standard 73B. Enumeration of coliform bacteria. ICMSF (1978). Microorganisms in Food, University of Toronto Press.
- ISO (1986) Standard 5541-1 Milk and Milk Products. Enumeration of coliforms. Colony count technique at 30 °C.
- ISO (2006) Standard 4832:2006 (E) - Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the enumeration of coliforms - Colony-count technique.
- ISO 11133:2014/Amd 1:2018. Microbiology of food, animal feed and water. Preparation, production, storage and performance testing of culture media.
- MARSHALL, R.T. (1992) Standard Methods for the Examination of Dairy Products. 16th ed. APHA, Washington. DC.
- PASCUAL ANDERSON, Mª R. (1992) Microbiología Alimentaria. Díaz de Santos, S.A., Madrid.
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