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Terreni pronti all'uso

Violet Red Bile Lactose Agar (VRBL) ISO

Terreno per la rilevazione e la conta dei coliformi nel latte e negli altri prodotti lattiero-caseari, secondo le norme APHA e ICMSF, FIL-IDF e ISO.

Codice
LC-910
Formati
4 formati
Controllo qualità ISO 17025
Sì
Norme
ISO 4832

Violet Red Bile Agar corrisponde alla formulazione classica dei terreni standardizzati per lo screening dei coliformi nel latte e negli altri prodotti lattiero-caseari. Questo terreno è stato adottato per la conta dei coliformi e per la differenziazione tra gli organismi che fermentano il lattosio e quelli che non lo fermentano, grazie al suo contenuto di cristal violetto e di sali biliari, le cui proprietà inibenti o selettive sono state ampiamente confermate.

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CodiceFormatoPrezzo
LC-91020 piastre da 90 mmconservazione da 2 a 14 °C, validità minima 1 mese
LC-453230 piastre a contatto Rodac da 65 mmconservazione da 2 a 25 °C, validità minima 3 mesi
LC-468210 flaconi da 200 mLconservazione da 8 a 25 °C, validità minima 4 mesi
LC-516110 flaconi da 100 mLconservazione da 8 a 25 °C, validità minima 4 mesi

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Caratteristiche principali

Applicazioni

Conta selettiva dei coliformi.

Settori

Prodotti lattiero-caseari, alimenti, acque.

Norme

ISO 4832.

Descrizione e tecnica

Tecnica

Per l'inoculo delle piastre seguire i metodi standard del laboratorio o le norme applicabili (metodo di semina a spirale, metodi ecometrici, semina per striscio, serie di diluizioni, spatolamento con spatola di Drigalski, ecc.).

Le piastre si leggono dopo 24 ore di incubazione a 30 °C.

La dimensione delle colonie va da 2 a 5 mm, a seconda della quantità per piastra. Se si sviluppano enterococchi, appaiono piccoli e di colore rosa. Gli enterobatteri che fermentano il lattosio assumono un colore rosso scuro con una zona chiara intorno, mentre quelli che non fermentano il lattosio formano colonie incolori.

LC-4532, piastre a contatto

Le piastre a contatto si usano nel controllo microbiologico della disinfezione e della pulizia delle superfici. Agiscono contemporaneamente da campionatore e da terreno di coltura per l'incubazione, senza bisogno di altri passaggi intermedi.

Le piastre hanno una forma adatta a questa funzione e si possono usare con diversi terreni di coltura, a seconda del tipo di microrganismo da controllare. In media le piastre offrono una superficie di contatto di circa 25 cm².

Per l'uso, togliere il coperchio e premere delicatamente il terreno di coltura sulla superficie da controllare, assicurando il contatto tra le due superfici. Si toglie la piastra a contatto e la si chiude con il coperchio, per evitare la contaminazione dall'aria. Si consiglia di fissare il coperchio con nastro adesivo e di etichettare il fondo con i dati del campionamento (luogo, data e ora).

Se le superfici da campionare sono ruvide, le piastre a contatto non fanno un buon contatto, anche aumentando la pressione. In questi casi si consiglia di delimitare un'area di 25 cm², strofinarla energicamente con un tampone sterile bagnato e poi strofinare il tampone sulla piastra a contatto.

Se si verifica l'efficacia di un processo di pulizia o di disinfezione, le piastre a contatto vanno usate entro due ore dalla fine del processo, assicurandosi che la superficie da campionare sia asciutta. Si consiglia di includere sempre controlli positivi, campionando l'area prima della disinfezione o le zone sporche accanto all'area disinfettata.

Il tecnico stabilisce la frequenza del campionamento e della disinfezione secondo criteri di prestazione. Applicare l'agar direttamente sulla superficie da monitorare, distribuendo la pressione su tutta la piastra per 10 secondi. Pulire la superficie in cui è stato raccolto il campione, per togliere ogni traccia di agar.

Le piastre inoculate si incubano a 30 ± 1 °C per 18-24 h.

Nota: le piastre a contatto si usano per monitorare la contaminazione microbiologica delle superfici e dell'aria in camere bianche, isolatori, RABS, industrie alimentari e ospedali. Il doppio/triplo involucro irradiato garantisce che la confezione stessa non contamini l'ambiente, perché il primo involucro si toglie appena prima di entrare nell'area pulita.

LC-4682 e LC-5161, flaconi

Per l'uso, il contenuto del flacone va versato in piastre. Il terreno di coltura va fuso secondo le istruzioni del produttore, a bagnomaria (100 °C) o nel forno a microonde. Non applicare mai calore diretto per fondere un terreno. Le temperature e i tempi di fusione dipendono dalla forma del contenitore, dal volume di terreno e dalla fonte di calore. Prima di fondere qualsiasi terreno, allentare il tappo a vite del contenitore per evitare che si rompa. Il terreno va fuso una sola volta e poi usato. I terreni con agar non vanno fusi più volte, perché le loro caratteristiche cambiano a ogni nuova fusione. Il surriscaldamento va evitato quanto il riscaldamento prolungato, soprattutto per i terreni a pH acido o alcalino.

Una volta fuso il terreno, versare le piastre con tecniche asettiche. Per l'inoculo seguire i metodi standard del laboratorio o le norme applicabili: metodo di semina a spirale, semina per striscio, metodi ecometrici, serie di diluizioni, spatolamento, ecc.

La procedura raccomandata è l'inoculo direttamente nelle piastre di Petri, con l'agar fuso raffreddato a 45-47 °C. Le piastre si possono leggere dopo 24 ore di incubazione a 30 °C.

La dimensione delle colonie va da 2 a 5 mm, a seconda della quantità per piastra. Se si sviluppano enterococchi, appaiono piccoli e di colore rosa. Gli enterobatteri che fermentano il lattosio assumono un colore rosso scuro con una zona chiara intorno, mentre quelli che non fermentano il lattosio formano colonie incolori.

Presentazione

CodicePresentazioneRiempimentoConfezione
LC-91020 piastre pronte da 90 mm21 ± 2 mL1 scatola con 2 confezioni da 10 piastre. Cellophane singolo.
LC-453230 piastre a contatto, doppio involucro15 ± 2 mL1 scatola con 5 blister (base in alluminio, PVDC e busta) da 6 piastre a contatto.
LC-468210 flaconi pronti da 250 mL200 ± 5 mL1 scatola con 10 flaconi da 250 mL. Tappo metallico non perforabile.
LC-516110 flaconi pronti da 125 mL100 ± 3 mL1 scatola con 10 flaconi da 125 mL. Tappo metallico non perforabile.

Composizione

Componenteg/L
Estratto di lievito3,000
Peptone di carne7,000
Miscela di sali biliari1,500
Lattosio10,000
Cloruro di sodio5,000
Rosso neutro0,030
Cristal violetto0,002
Agar13,000; LC-4532: 15,0

LC-4682 e LC-5161, flaconi

Componenteg/L
Estratto di lievito3,000
Peptone7,000
Sali biliari n. 31,500
Lattosio10,00
Cloruro di sodio5,000
Rosso neutro0,030
Cristal violetto0,002
Agar13,000

Controllo qualità

Controllo fisico-chimico

ColoreRosa-violetto
pH7,4 ± 0,2 a 25 °C

Controllo microbiologico

Semina a spirale (LC-4532: inoculo): intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ UFC (selettività).

Aerobiosi. Incubazione a 30 ± 1 °C per 18-24 h.

MicrorganismoCrescita
Enterococcus faecalisATCC 19433, WDCM 00009Inibito
Ps. aeruginosaATCC 9027, WDCM 00026Colonie da incolori a beige
Salmonella typhimuriumATCC 14028, WDCM 00031Colonie da incolori a beige
Escherichia coliATCC 8739, WDCM 00012Buona (≥ 50 %) - colonie rosso porpora
Escherichia coliATCC 25922, WDCM 00013Buona (≥ 50 %) - colonie rosso porpora

LC-4682 e LC-5161, flaconi: controllo microbiologico

Fusione - piastre per inclusione - inoculo: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ UFC (selettività).

Aerobiosi. Incubazione a 30 ± 1 °C per 18-24 h.

MicrorganismoCrescita
Enterococcus faecalisATCC 19433, WDCM 00009Inibito
Escherichia coliATCC 8739, WDCM 00012Buona (≥ 50 %) - colonie rosso porpora
Escherichia coliATCC 25922, WDCM 00013Buona (≥ 50 %) - colonie rosso porpora
Ps. aeruginosaATCC 27853, WDCM 00025Buona - colonie incolori
Salmonella typhimuriumATCC 14028, WDCM 00031Buona - colonie incolori

Controllo di sterilità

Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.

Bibliografia

  • DOWNES, F.P. & K. ITO (2001). Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Food. 4th ed. APHA, Washington. DC.
  • FIL-IDF. (1998) Standard 73B. Enumeration of coliform bacteria. ICMSF (1978). Microorganisms in Food, University of Toronto Press.
  • ISO (1986) Standard 5541-1 Milk and Milk Products. Enumeration of coliforms. Colony count technique at 30 °C.
  • ISO (2006) Standard 4832:2006 (E) - Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the enumeration of coliforms - Colony-count technique.
  • ISO 11133:2014/Amd 1:2018. Microbiology of food, animal feed and water. Preparation, production, storage and performance testing of culture media.
  • MARSHALL, R.T. (1992) Standard Methods for the Examination of Dairy Products. 16th ed. APHA, Washington. DC.
  • PASCUAL ANDERSON, Mª R. (1992) Microbiología Alimentaria. Díaz de Santos, S.A., Madrid.

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