Buffered Peptone Water EP/USP

Il digerito pancreatico di caseina fornisce azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. I fosfati di potassio agiscono come sistema tampone e il cloruro di sodio fornisce gli elettroliti essenziali per il trasporto e l'equilibrio osmotico.

Si usa nella preparazione dei campioni per sciogliere o diluire i prodotti idrosolubili (diluizione 1:10) e i prodotti non grassi insolubili in acqua (in generale diluizione 1:10, ma alcuni possono richiedere volumi maggiori di Buffered Peptone Water). I prodotti grassi si omogeneizzano con un agente tensioattivo sterile adatto, come il polisorbato o il Tween 80, scaldando se necessario a non più di 40 °C o, in casi eccezionali, a non più di 45 °C. Si mescolano con cura e, se necessario, si mantiene la temperatura a bagnomaria. Si aggiunge una quantità sufficiente di diluente Buffered Peptone Water preriscaldato per ottenere una diluizione 1:10 del prodotto originale.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 16,1 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Distribuire in contenitori adatti e sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti.

Secondo la Farmacopea Europea

Secondo la Farmacopea Europea, per l'esame di TAMC e TYMC nei prodotti:

Filtrazione su membrana:

1. Preparare il campione del prodotto sospendendo, sciogliendo o diluendo il prodotto da esaminare in Buffered Peptone Water.
2. Trasferire la quantità adatta di campione su una membrana filtrante.
3. Porre la membrana sulla superficie di Trypticasein Soy Agar (LC-1068) nel caso di TAMC o di Sabouraud Dextrose Agar (LC-1024) nel caso di TYMC.
4. Incubare la piastra di Trypticasein Soy Agar (LC-1068) a 30-35 °C per 3-5 giorni e la piastra di Sabouraud Dextrose Agar (LC-1024) a 20-25 °C per 5-7 giorni.

Metodi di conta su piastra:

1. Preparare il campione del prodotto sospendendo, sciogliendo o diluendo il prodotto da esaminare in Buffered Peptone Water.
2. Inoculare le piastre di Trypticasein Soy Agar (LC-1068) nel caso di TAMC o di Sabouraud Dextrose Agar (LC-1024) nel caso di TYMC, secondo il metodo per inclusione o il metodo per spatolamento in superficie.
3. Incubare le piastre di Trypticasein Soy Agar (LC-1068) a 30-35 °C per 3-5 giorni e le piastre di Sabouraud Dextrose Agar (LC-1024) a 20-25 °C per 5-7 giorni.
4. Selezionare le piastre corrispondenti a una data diluizione che mostrano il numero più alto di colonie inferiore a 250 (TAMC) o a 50 (TYMC).

Metodo del numero più probabile (solo per TAMC):

1. Preparare e diluire il campione del prodotto da esaminare in Buffered Peptone Water e inoculare in provette di Trypticasein Soy Broth (LC-1224).
2. Incubare tutte le provette a 30-35 °C per 3-5 giorni.
3. Registrare per ogni livello di diluizione il numero di provette che mostrano crescita e determinare il numero più probabile di microrganismi.

• European Pharmacopoeia 9.0