CCDA Campylobacter Agar ISO

Descrizione

Dopo aver stabilito che le specie di Campylobacter crescono meglio su Nutrient Broth No. 2 solidificato che su altri terreni, alcuni ricercatori (1983) hanno condotto un'indagine sistematica sulle alternative al sangue per neutralizzare la tossicità dell'ossigeno. La combinazione migliore è risultata quella di carbone allo 0,4 %, solfato ferroso allo 0,25 % e piruvato di sodio allo 0,25 %.

Un altro studio ha esaminato l'effetto soppressivo di diversi inibitori sul microbiota indesiderato e ha indicato il desossicolato e la cefazolina come gli agenti inibitori più efficaci. In seguito, nel 1984, Hutchinson e Bolton hanno sostituito la cefazolina (10 mg/L) con il cefoperazone (32 mg/L). In questo modo crescevano meno contaminanti e il terreno modificato (CCD Agar modificato o mCCDA) si poteva usare a 37 °C. Era però necessaria l'amfotericina B, per impedire la crescita eccessiva dei lieviti capaci di crescere a 37 °C ma non a 42 °C.

Nel 1993 Aspinall et al. hanno sviluppato una modifica di mCCDA, pensata per l'uso a 37 °C, per isolare C. upsaliensis e le altre specie di campylobacter termofili. Questo terreno contiene 8 mg/L di cefoperazone e 4 mg/L di teicoplanina, al posto dei 32 mg/L di cefoperazone di mCCDA. La teicoplanina ha uno spettro antimicrobico simile a quello della vancomicina, attivo soprattutto contro i batteri Gram-positivi. Rispetto a mCCDA, la formulazione finale di questo terreno, chiamata CAT Agar, ha isolato dalle feci lo stesso numero di Campylobacter spp. diversi da C. upsaliensis ed è superiore a mCCDA per C. upsaliensis, con una crescita leggermente maggiore della microflora competitiva.

Tecnica

Subito prima dell'uso, asciugare con cura le piastre di agar in una stufa di essiccamento, preferibilmente senza coperchio e con la superficie dell'agar rivolta verso il basso, finché sulla superficie dell'agar non resta umidità visibile (al massimo 30 minuti).

Con la coltura ottenuta dal brodo di arricchimento (Bolton Broth), inoculare il terreno con un'ansa sterile. Incubare le piastre a 41,5 ± 0,5 °C in atmosfera microaerobica (circa 5 % di O₂, 10 % di CO₂ e 85 % di N₂ o H₂) per 44 ± 4 ore.

• I ceppi di Campylobacter jejuni danno una crescita grigia, umida, piatta e a volte espansa, che può essere accompagnata da una sfumatura verde e/o da un riflesso metallico.
• I ceppi di Campylobacter coli tendono ad avere un colore grigio crema, sono umidi e spesso danno colonie più distinte.
• I ceppi di Campylobacter lari sono più variabili e danno tutti e due i tipi di morfologia delle colonie.
• A volte su questo terreno possono crescere organismi contaminanti, tra cui Pseudomonas spp. resistenti al cefoperazone, Enterobacteriaceae e alcuni streptococchi e lieviti.

Controllo fisico-chimico

Controllo microbiologico

Semina a spirale: intervallo pratico 100 ± 20 UFC, minimo 50 UFC (produttività) / 10⁴-10⁶ UFC (selettività).

Controllo microbiologico secondo ISO 11133:2014/Amd 1:2018.

Microaerofilia. Incubazione a 41,5 ± 1 °C; lettura a 44 ± 4 h.

Controllo di sterilità

Incubazione 48 ore a 30-35 °C e 48 ore a 20-25 °C: NESSUNA CRESCITA.

Controllo a 7 giorni dopo l'incubazione nelle stesse condizioni.

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