Nucleasi e proteasi
DNase I (EC 3.1.21.1), bovine pancreas
Endonucleasi da pancreas bovino in polvere liofilizzata, ≥3.000 U/mg (Kunitz)
- Codice
- M3028
- Categoria
- Nucleasi e proteasi
- Formati
- 2 formati
- Produttore
DNasi I da pancreas bovino, purificata per cromatografia e fornita come polvere liofilizzata priva di sali, con attività minima di 3.000 unità Kunitz per mg. L'enzima taglia DNA a singolo e doppio filamento e cromatina, generando oligo e mononucleotidi con estremità 5'-fosfato e 3'-OH. Non è garantita priva di RNasi: prima dell'impiego nella preparazione di RNA va sottoposta a un trattamento di inattivazione delle RNasi.
Caratteristiche principali
Elevata attività specifica
Almeno 3.000 U/mg (Kunitz), per digestioni efficienti con piccole quantità di enzima.
Tipo di taglio regolabile
Con Mg2+ introduce interruzioni a singolo filamento, con Mn2+ tagli a doppio filamento; la massima attivazione si ottiene con Mg2+ e Ca2+.
Formato liofilizzato
Polvere priva di sali, solubile a 5 mg/mL in NaCl 150 mM, per preparare soluzioni madre su misura.
Impiego versatile
Dalla dissociazione dei tessuti alla nick translation, fino al footprinting e agli studi sulla cromatina.
Applicazioni
- Prevenzione dell'aggregazione cellulare durante la dissociazione dei tessuti
- Rimozione del DNA contaminante da preparazioni di RNA prima della RT-PCR, dopo trattamento anti-RNasi
- Rimozione del DNA nell'isolamento di singole cellule
- Generazione di nick casuali per la nick translation
- Saggi di footprinting
- Studi sulla cromatina
- Digestione del DNA
Specifiche tecniche
| Origine | Pancreas bovino |
|---|---|
| Forma | Polvere liofilizzata priva di sali, purificata per cromatografia |
| Attività | ≥3.000 U/mg (Kunitz) |
| Peso molecolare | Circa 31 kDa |
| Condizioni ottimali | pH 7,8; attivata da Mg2+ e Ca2+; Ca2+ 5 mM protegge dalla digestione proteolitica |
| Inibitori | EDTA, EGTA, DTT, SDS, beta-mercaptoetanolo, sali oltre 100 mM |
| Inattivazione | Calore (99 °C per 10 minuti), anche in combinazione con EDTA in rapporto molare circa 1:1 con i cationi bivalenti |
| RNasi | Non garantita priva di RNasi: per i lavori con RNA serve un pretrattamento |
| CAS | 9003-98-9 |
| Conservazione | -20 °C; soluzioni madre (almeno 1 mg/mL) stabili oltre un anno a -20 °C |
| Spedizione | Su ghiaccio |
| Controllo qualità | Attività ≥3.000 U/mg; test RNasi con RNA marcato con trizio (rilascio massimo 3%) |
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