King A Medium (Pseudomonas P) Agar USP/ISO

Pseudomonas aeruginosa è un batterio a vita libera, presente nel suolo e nell'acqua. È sempre più noto come patogeno opportunista emergente di importanza clinica. Diversi studi epidemiologici ne seguono la presenza come patogeno nosocomiale e affermano che la resistenza agli antibiotici è in aumento negli isolati clinici.

Questo terreno favorisce la produzione di piocianina, un pigmento blu-verde che ossidandosi diventa marrone, è solubile in acqua e, a differenza della fluoresceina, è solubile in cloroformio. Il pigmento diffonde in tutto il terreno e si osserva il colore blu. La produzione di piocianina si conferma con l'estrazione in cloroformio. Aggiungere 2 mL di cloroformio a una provetta di terreno e agitare delicatamente per rimuovere il pigmento.

Questo terreno contiene digerito pancreatico di gelatina come ricca fonte di azoto e altri nutrienti per la crescita, come vitamine, minerali e aminoacidi. Il peptone di gelatina è povero di fosforo, per ridurre l'azione inibitoria sulla produzione di piocianina. Il solfato di potassio e il cloruro di magnesio forniscono cationi che attivano la produzione di piocianina e aumentano la produzione di pigmento. Il glicerolo è una fonte di carbonio. L'agar batteriologico è l'agente solidificante.

Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.

Preparazione

Sospendere 46,4 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Aggiungere 10 mL di glicerolo. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Distribuire in contenitori adatti e sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti.

Secondo ISO 22717

Per la conferma di Pseudomonas aeruginosa secondo ISO 22717:

1. Trapiantare le colonie presuntive di Pseudomonas aeruginosa (pigmento giallo-verde e fluorescenza sotto radiazione UV) ottenute su Cetrimide Agar (LC-1102).
2. Incubare le piastre a 32,5 ± 2,5 °C per 24, 48 e 72 h.
3. Pseudomonas aeruginosa forma colonie circondate da una zona da blu a verde, dovuta alla formazione di piocianina, o da una zona da rossa a marrone scuro, dovuta alla produzione di piorubina.

• King E.O., Ward M.K., Raney D.E. J. Lab. and Clin. Med., 1954. 44. 301-307.
• Bacteriological Analytical Manual, 8th edition. 1995. AOAC International, Gaithersburg, MD.
• The United States Pharmacopoeia. 1995. The United States Pharmacopoeia, 23rd ed. United States Pharmacopoeial Convention, Rockville, MD.