Thioglycollate Medium ISO

Il terreno è raccomandato dalla norma ISO 7937 per la conta di Clostridium perfringens con la tecnica di conta delle colonie, nella fase di conferma.

È ben tamponato, così che inoculi acidi o alcalini difficilmente alterano la reazione del terreno. Thioglycollate Medium è raccomandato anche per la coltivazione di Clostridium e di Desulfotomaculum nigrificans.

Il tioglicolato di sodio nel terreno neutralizza l'effetto batteriostatico dei composti mercuriali usati come conservanti nelle soluzioni farmaceutiche, e rende i terreni al tioglicolato utili per esaminare materiali che contengono metalli pesanti. È necessario stabilire l'attività batteriostatica del prodotto con il metodo descritto nella USP (1970), per evitare risultati falsi negativi.

La piccola quantità di agar facilita la rilevazione dei contaminanti durante la prova di sterilità, perché ritarda la dispersione della CO₂, la diffusione dell'O₂ e delle sostanze riducenti. La fonte di azoto è fornita dal digerito enzimatico di caseina e le vitamine dall'estratto di lievito. Il tioglicolato di sodio e la L-cistina abbassano il potenziale di ossido-riduzione del terreno eliminando l'O₂, per mantenere un Eh basso, e impediscono così l'accumulo di perossidi che possono essere tossici per alcuni organismi. La resazurina è un indicatore di ossidazione e diventa rosa. Il destrosio è il carboidrato fermentabile che fornisce carbonio ed energia. Il cloruro di sodio fornisce gli elettroliti essenziali per il trasporto e l'equilibrio osmotico. Il terreno si usa in forma liquida in provetta oppure come terreno solido inclinato, con aggiunta di agar (1,5 %).

Preparazione

Sospendere 29,8 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Distribuire in contenitori adatti e sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti. Se il terreno conservato presenta più del 20 % di colore rosa (per ossidazione), le provette vanno riscaldate a bagnomaria per espellere l'ossigeno. Non riscaldare più di una volta.

Secondo ISO 7937

Per la conferma di Clostridium perfringens con Lactose Sulfite Broth secondo ISO 7937:

1. Inoculare ogni colonia presuntiva in Thioglycollate Medium.
2. Incubare in anaerobiosi a 37 °C per 18-24 ore. La torbidità dovrebbe essere di 1-2 F.T.U.
3. Trasferire 5 gocce della coltura in tioglicolato in Lactose Sulfite Broth (LC-1009).
4. Incubare in aerobiosi a 46 °C per un tempo da 18 a 24 h.
5. Esaminare le provette di Lactose Sulfite Broth per la produzione di gas e la presenza di un colore nero (precipitato di solfito di ferro).

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• International Standard ISO 7937: Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal Method for the enumeration of Clostridium perfringens - Colony-count technique