Lactose Sulfite Broth Base ISO

La base nutritiva offre le condizioni ottimali per lo sviluppo di Clostridium. Il peptone di caseina fornisce azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'estratto di lievito è la fonte di vitamine, in particolare del gruppo B. Il lattosio è un carboidrato complesso, fonte di energia. Il cloruro di sodio fornisce gli elettroliti essenziali per il trasporto e l'equilibrio osmotico. La cisteina cloridrato è l'agente riducente.

Le colonie che producono acido solfidrico si riconoscono per un annerimento dovuto alla reazione del bisolfito di sodio e del sale citrato ferrico ammonico. I contenitori che mostrano un annerimento e un'abbondante formazione di gas nella campanella di Durham (almeno 1/10 del volume) indicano la presenza di C. perfringens.

Preparazione

Sospendere 20,3 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Distribuire porzioni da 8 mL in provette con campanelle di Durham per la raccolta e la rilevazione del gas. Sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti. Prima dell'uso aggiungere a ogni provetta 0,5 mL di una soluzione di metabisolfito di sodio a 12 g/L e 0,5 mL di una soluzione di citrato ferrico ammonico a 10 g/L. Le due soluzioni devono essere preparate al momento e sterilizzate.

Secondo ISO 7937

Per la conferma di Clostridium perfringens con Lactose Sulfite Broth secondo ISO 7937:

1. Inoculare ogni colonia presuntiva in Thioglycollate Medium.
2. Incubare in anaerobiosi a 37 °C per 18-24 ore. La torbidità dovrebbe essere di 1-2 F.T.U.
3. Trasferire 5 gocce della coltura in tioglicolato in Lactose Sulfite Broth.
4. Incubare in aerobiosi a 46 °C per un tempo da 18 a 24 h.
5. Esaminare le provette di Lactose Sulfite Broth per la produzione di gas e la presenza di un colore nero (precipitato di solfito di ferro).

• ISO Standard 7937 Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method for enumeration of Clostridium perfringens. Colony count technique.
• ISO 11133:2014. Microbiology of food, animal feed and water. Preparation, production, storage and performance testing of culture media.