Terreni disidratati
Bile Esculin Azide Agar ISO
Per l'isolamento selettivo e l'identificazione presuntiva degli enterococchi intestinali con il metodo di filtrazione su membrana.
- Codice
- LC-1005
- Categoria
- Terreni disidratati
- Formato
- 500 g
- Conservazione
- da 2 a 25 °C
- Validità minima garantita
- 15 mesi
- Norme
- ISO 7899-2
- Disponibile anche
- Terreno pronto all'uso, 1 formato (LC-952)
- Disponibile anche
- Terreno disidratato, 1 formato (LC-1372)
- Disponibile anche
- Terreno pronto all'uso, 1 formato (LC-4701)
Bile Esculin Azide Agar è una modifica di Bile Esculin Agar (LC-1031), con l'aggiunta di sodio azide come inibitore e con la riduzione della concentrazione di bile. Il terreno che ne risulta è più selettivo, ma garantisce ancora una crescita rapida e un recupero efficiente degli enterococchi. La capacità di idrolizzare l'esculina in presenza di bile è una caratteristica degli enterococchi. I microrganismi positivi all'idrolisi dell'esculina idrolizzano il glicoside esculina in esculetina e destrosio. L'esculetina reagisce con il citrato ferrico ammonico formando una colonia bruno scuro o nera. La bile di bue non inibisce gli enterococchi, mentre gli altri batteri Gram-positivi sono inibiti. La sodio azide inibisce i batteri Gram-negativi. Il triptone, il peptone e l'estratto di lievito forniscono i nutrienti essenziali per la crescita. Il cloruro di sodio fornisce l'equilibrio osmotico. L'agar batteriologico è l'agente solidificante.
Caratteristiche principali
Applicazioni
Isolamento selettivo degli enterococchi.
Settori
Acque.
Norme
ISO 7899-2.
Preparazione
56,6 g in un litro di acqua distillata; far bollire per un minuto, sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti.
Principio e uso
La presenza di enterococchi intestinali è un indicatore di contaminazione fecale, soprattutto quando la contaminazione è avvenuta molto tempo prima e i batteri coliformi meno resistenti, compreso Escherichia coli, possono essere già morti quando si esegue l'analisi.
La tolleranza alla bile e la capacità di idrolizzare l'esculina costituiscono una prova presuntiva affidabile per l'identificazione degli enterococchi. Intorno alle colonie compare un colore bruno (reazione positiva).
Specifiche tecniche
| Solubilità | Senza residui |
|---|---|
| Aspetto | Polvere fine |
| Colore del terreno disidratato | Tostato |
| Colore del terreno preparato | Tornasole |
| pH finale (25 °C) | 7,1 ± 0,1 |
| Quantità per litro | 56,6 g |
| Conservazione | da 2 a 25 °C |
Formula
| Componente | g/L |
|---|---|
| Agar batteriologico | 15 |
| Esculina | 1 |
| Citrato ferrico ammonico | 0,5 |
| Bile di bue | 10 |
| Peptone | 3 |
| Sodio azide | 0,15 |
| Cloruro di sodio | 5 |
| Triptone | 17 |
| Estratto di lievito | 5 |
Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.
Preparazione e uso
Preparazione
Sospendere 56,6 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti. Raffreddare a 50-60 °C e distribuire in contenitori adatti. Il surriscaldamento può far scurire il terreno. Se si usano provette, lasciar raffreddare in posizione inclinata.
Secondo ISO 7899-2
Per la rilevazione e la conta degli enterococchi secondo ISO 7899-2:
- Filtrare un volume misurato di acqua attraverso una membrana filtrante.
- Porre la membrana su Slanetz-Bartley Medium (LC-1109).
- Incubare a 36 ± 2 °C per 44 ± 4 h.
- Trasferire la membrana con le colonie caratteristiche, incubata prima in Slanetz-Bartley Medium (LC-1109), senza capovolgerla, su una piastra di Bile Esculin Azide Agar preriscaldata a 44 °C.
- Incubare a 44 ± 0,5 °C per 2 ore.
- Leggere subito la piastra.
- Si considera che le colonie tipiche che mostrano un colore bruno-nero nel terreno circostante diano reazione positiva; si contano come enterococchi intestinali.
Controllo qualità
Prova microbiologica
Condizioni di incubazione: 44 ± 0,5 °C / 2 h.
Condizioni di inoculo: conferma (trasferimento dalla membrana incubata prima in Slanetz-Bartley Medium [E. faecalis ed E. faecium] / TSA [E. coli]).
| Microrganismo | Reazione caratteristica |
|---|---|
| Enterococcus faecalisATCC 19433 | Alone bruno-nero |
| Escherichia coliATCC 25922 | Assenza di alone bruno-nero |
| Enterococcus faecalisATCC 29212 | Alone bruno-nero |
| Enterococcus faeciumATCC 6057 | Alone bruno-nero |
Bibliografia
- ISO 7899-2. Water quality - Detection and enumeration of intestinal enterococci - Part 2: Membrane filtration method.
- Facklam, R.R. and M.D. Moody 1970. Presumptive identification of Group D Streptococci: The bile-esculin test. Appl. Microbiol 20:245.
- Ruoff, K.L. 1995 Streptococcus. In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (eds), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
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