Terreni disidratati
Reinforced Clostridial Medium EP/USP
Per la coltivazione e la conta di Clostridium e di altri anaerobi.
- Codice
- LC-1007
- Categoria
- Terreni disidratati
- Formato
- 500 g
- Conservazione
- da 2 a 25 °C
- Validità minima garantita
- 15 mesi
- Norme
- Farmacopea EuropeaUSP
Reinforced Clostridial Medium è un terreno semisolido. È raccomandato per la coltivazione e la conta degli anaerobi, in particolare Clostridium e altri microrganismi, negli alimenti e in altri campioni.
Caratteristiche principali
Applicazioni
Conta non selettiva degli anaerobi e rilevazione di Clostridium.
Settori
Controllo qualità del prodotto finito, farmaceutico e veterinario.
Norme
Farmacopea Europea, USP.
Preparazione
38 g in un litro di acqua distillata; far bollire per un minuto, sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti.
Principio e uso
Fu formulato da Hirsch e Grinstead nel 1954. Il loro lavoro dimostrò che il terreno era superiore agli altri nel sostenere la crescita di Clostridium da piccoli inoculi e dava conte di cellule vitali più alte.
Il peptone e l'estratto di manzo forniscono azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'estratto di lievito è la fonte di vitamine, in particolare del gruppo B. Il destrosio è il carboidrato fermentabile che fornisce carbonio ed energia. Il cloruro di sodio fornisce gli elettroliti essenziali per il trasporto e l'equilibrio osmotico. L'amido nel terreno agisce come fattore di crescita, probabilmente come colloide protettore, e neutralizza i prodotti tossici che si formano durante lo sviluppo dei microrganismi. La L-cisteina cloridrato è l'agente riducente e l'acetato di sodio è il tampone.
Poiché è un terreno di arricchimento non selettivo, permette la crescita di vari microrganismi anaerobi e di batteri facoltativi quando è incubato in anaerobiosi.
La Farmacopea Europea e la USP raccomandano Reinforced Clostridial Medium, al paragrafo 2.6.13, "Esame microbiologico dei prodotti non sterili: prove per microrganismi specificati", per la ricerca dei clostridi nei prodotti.
Specifiche tecniche
| Solubilità | Senza residui |
|---|---|
| Aspetto | Polvere fine |
| Colore del terreno disidratato | Crema |
| Colore del terreno preparato | Ambra limpido, leggermente opalescente |
| pH finale (25 °C) | 6,8 ± 0,2 |
| Quantità per litro | 38 g |
| Conservazione | da 2 a 25 °C |
Formula
| Componente | g/L |
|---|---|
| Agar batteriologico | 0,5 |
| Cisteina cloridrato | 0,5 |
| Glucosio monoidrato | 5 |
| Estratto di manzo | 10 |
| Peptone | 10 |
| Acetato di sodio | 3 |
| Cloruro di sodio | 5 |
| Amido solubile | 1 |
| Estratto di lievito | 3 |
Formula tipica in g/L, adattata e/o integrata secondo necessità per soddisfare i criteri di prestazione.
Preparazione e uso
Preparazione
Sospendere 38 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Distribuire in contenitori adatti e sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti. Raffreddare a 45-50 °C e, se si desidera, aggiungere 0,02 g/L di polimixina B in soluzione sterilizzata per filtrazione.
Secondo la Farmacopea Europea
Prova dei microrganismi specificati (clostridi) secondo la Farmacopea Europea:
- Usato senza sangue.
- Inoculare e incubare, in anaerobiosi, Reinforced Clostridial Medium alla temperatura di 30-35 °C per 48 ore.
- Eseguire trapianti su Columbia Agar (LC-1104).
- Aggiungere 20 mg/L di gentamicina, se necessario.
- Incubare, in anaerobiosi, a 30-35 °C per 48 ore.
- Le colonie cresciute in anaerobiosi che sono catalasi-negative indicano la presenza di clostridi. Questo risultato va confermato con prove biochimiche.
Controllo qualità
Secondo la Farmacopea Europea
Clostridium sporogenes.
Condizioni di incubazione: 30-35 °C, in anaerobiosi / 48-72 h.
Condizioni di inoculo: ≤ 100 UFC.
Altri ceppi
Condizioni di incubazione: 30-35 °C, in anaerobiosi / 48 h.
| Microrganismo | Specifica |
|---|---|
| Clostridium sporogenesATCC 11437 | Crescita buona |
| Clostridium perfringensATCC 13124 | Crescita buona |
| Clostridium sporogenesATCC 19404 | Crescita buona |
| Clostridium difficileATCC 9689 | Crescita buona |
Bibliografia
- Andrews, W.H. (ed) 1995. Microbial methods p. 1-119. In Official methods of analysis of AOAC International. 16th ed.
- European Pharmacopoeia. 9.0.
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