Antibiotic Medium No.2 (Base Agar)

L'attività (potenza) di un antibiotico può essere dimostrata, in condizioni adatte, dal suo effetto inibitorio sui microrganismi. Una riduzione dell'attività antimicrobica può rivelare alterazioni non evidenziate dai metodi chimici. I terreni per antibiotici sono identificati da numeri, secondo i nomi assegnati da Grove e Randall in "Assay methods of antibiotics". L'uso di terreni di coltura standardizzati e il controllo rigoroso di tutte le condizioni della prova sono requisiti essenziali nel saggio microbiologico degli antibiotici, per ottenere risultati soddisfacenti.

Questo terreno ha la stessa formula di Antibiotic Medium No. 5 (LC-1524) e di Antibiotic Medium No. 8 (LC-1004), con la differenza che il pH del terreno è stato regolato a 6,6. Per la prova dell'antibiotico, l'Antibiotic Medium va preparato lo stesso giorno in cui si esegue la prova. Il campione può essere esaminato con i due metodi, per diluizione e per diffusione su piastra.

Il peptone di gelatina e l'estratto di manzo forniscono azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'estratto di lievito è fonte di vitamine, in particolare del gruppo B. L'agar batteriologico è l'agente solidificante.

Preparazione

Sospendere 25,5 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Sterilizzare a 121 °C per 15 minuti.

Istruzioni per l'uso

1. Liquefare il terreno e inocularlo a una temperatura adatta, per esempio da 48 °C a 50 °C, con una quantità nota di una sospensione di un microrganismo sensibile all'antibiotico da esaminare.
2. Agitare delicatamente la miscela per ottenere una distribuzione omogenea e versare subito in piastre di Petri una quantità di terreno inoculato tale da formare uno strato di 2-5 mm di spessore. In alternativa, il terreno può essere formato da 2 strati, di cui solo quello superiore inoculato.
3. Preparare una soluzione della sostanza di riferimento e una dell'antibiotico da esaminare, di concentrazioni note e di attività presunta uguale.
4. Applicare le soluzioni sulla superficie del terreno, per esempio in cilindri sterili di porcellana, di acciaio inossidabile, o in cavità preparate nell'agar.
5. In ogni cilindro o cavità va aggiunto lo stesso volume di soluzione.
6. In alternativa, usare un disco sterile di carta assorbente: impregnare i dischi con le soluzioni della sostanza di riferimento o con le soluzioni degli antibiotici da esaminare e porli sulla superficie dell'agar.

• Grove and Randall. Assay Methods of Antibiotics, Medical Encyclopedia Inc. New York 1955.
• United States Pharmacopoeia Convention. 1955. The United States Pharmacopoeia, 23rd Ed. Biological Tests and Assays, p. 1690-1696. The United States Pharmacopoeia Convention, Rockville, Md.