Antibiotic Medium No. 8 USP

L'attività (potenza) di un antibiotico può essere dimostrata, in condizioni adatte, dal suo effetto inibitorio sui microrganismi. Una riduzione dell'attività antimicrobica può rivelare alterazioni non evidenziate dai metodi chimici. I terreni per antibiotici sono identificati da numeri, secondo i nomi assegnati da Grove e Randall in "Assay methods of antibiotics". L'uso di terreni di coltura standardizzati e il controllo rigoroso di tutte le condizioni della prova sono requisiti essenziali nel saggio microbiologico degli antibiotici, per ottenere risultati soddisfacenti.

Questo terreno ha la stessa formula di Antibiotic Medium No. 5 (LC-1524) e di Antibiotic Medium No. 2 (LC-1002), con la differenza che il pH del terreno è stato regolato a 5,7. Per la prova dell'antibiotico, l'Antibiotic Medium va preparato lo stesso giorno in cui si esegue la prova. Il campione può essere esaminato con i due metodi, per diluizione e per diffusione su piastra.

Il peptone di gelatina e l'estratto di manzo forniscono azoto, vitamine, minerali e aminoacidi essenziali per la crescita. L'estratto di lievito è fonte di vitamine, in particolare del gruppo B. L'agar batteriologico è l'agente solidificante.

Preparazione

Sospendere 25,5 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 121 °C per 15 minuti, raffreddare a 45-50 °C e distribuire in piastre di Petri sterili.

Istruzioni per l'uso

1. Liquefare il terreno e inocularlo a una temperatura adatta, per esempio da 48 °C a 50 °C, con una quantità nota di una sospensione di un microrganismo sensibile all'antibiotico da esaminare.
2. Agitare delicatamente la miscela per ottenere una distribuzione omogenea e versare subito in piastre di Petri una quantità di terreno inoculato tale da formare uno strato di 2-5 mm di spessore. In alternativa, il terreno può essere formato da 2 strati, di cui solo quello superiore inoculato.
3. Preparare una soluzione della sostanza di riferimento e una dell'antibiotico da esaminare, di concentrazioni note e di attività presunta uguale.
4. Applicare le soluzioni sulla superficie del terreno, per esempio in cilindri sterili di porcellana, di acciaio inossidabile, o in cavità preparate nell'agar.
5. In ogni cilindro o cavità va aggiunto lo stesso volume di soluzione.
6. In alternativa, usare un disco sterile di carta assorbente: impregnare i dischi con le soluzioni della sostanza di riferimento o con le soluzioni degli antibiotici da esaminare e porli sulla superficie dell'agar.

• Grove and Randall. Assay Methods of Antibiotics, Medical Encyclopedia Inc. New York 1955.
• United States Pharmacopoeia Convention. 1955. The United States Pharmacopoeia, 23rd Ed. Biological Tests and Assays, p. 1690-1696.