Vibrio Chromogenic Agar

Il genere Vibrio comprende microrganismi il cui habitat naturale sono gli ecosistemi marini e fluviali. Si isolano spesso dall'acqua di mare, soprattutto nei mesi più caldi e quando la temperatura dell'acqua è superiore a 17 °C. Le specie di Vibrio sono le principali responsabili del colera e di intossicazioni alimentari nell'uomo.

Il terreno contiene estratto di lievito e peptoni, fonte di azoto, vitamine (in particolare del gruppo B, essenziali per la crescita batterica), minerali e aminoacidi. La bile speciale inibisce i microrganismi Gram-positivi. Saccarosio, glucosio e lattosio sono i carboidrati fermentabili che forniscono carbonio ed energia. Il cloruro di sodio fornisce gli elettroliti essenziali per il trasporto e l'equilibrio osmotico. Il citrato di sodio, il tiosolfato di sodio e il colato di sodio sono gli agenti selettivi e inibiscono i batteri Gram-positivi. Il substrato cromogenico è aggiunto per rilevare le specie di Vibrio attraverso un cambiamento di colore delle colonie.

Questo terreno è studiato per lo sviluppo e la differenziazione di 3 tipi di Vibrio, in base all'attività enzimatica di ciascun ceppo. L'attività della beta-glucosidasi si manifesta con colonie blu-verdi, come nel caso di V. parahaemolyticus. L'attività dell'enzima beta-galattosidasi dà colonie rosse o rosa nel caso di V. cholerae. Infine, le colonie bianco-giallastre sono di V. alginolyticus, che possiede la beta-galattosidasi, ma non la esprime per l'alta concentrazione di zuccheri. Il pH alcalino del terreno favorisce il recupero di V. cholerae.

La norma ISO 21872, Microbiologia della catena alimentare - Metodo orizzontale per la rilevazione delle specie di Vibrio potenzialmente enteropatogene - Rilevazione di Vibrio parahaemolyticus, Vibrio cholerae e Vibrio vulnificus (ISO 21872-1:2017), raccomanda un terreno selettivo alternativo a TCBS per la rilevazione delle specie enteropatogene di Vibrio.

Preparazione

Sospendere 90 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per un minuto fino a completa dissoluzione. Evitare di surriscaldare. NON STERILIZZARE IN AUTOCLAVE. Distribuire in contenitori adatti.

Secondo ISO 21872

Rilevazione di Vibrio parahaemolyticus, Vibrio cholerae e Vibrio vulnificus potenzialmente enteropatogeni secondo ISO 21872:

1. Prelevare le porzioni da analizzare (25 g o 25 mL) e omogeneizzare in 225 mL di terreno di arricchimento ASPW. Nel caso di grandi quantità di porzione da analizzare, l'ASPW va riscaldata a 37 ± 1 °C / 41,5 ± 1 °C prima dell'inoculo.
2. Incubare la sospensione iniziale a 41,5 ± 1 °C / 37 ± 1 °C per 6 ± 1 ore.
3. Trasferire 1 mL dalla superficie in una provetta con 10 mL di ASPW.
4. Incubare l'ASPW a 41,5 ± 1 °C / 37 ± 1 °C per 18 ± 1 ore.
5. Dalla coltura ottenuta in ASPW, inoculare 1 µL in TCBS Agar. Incubare un secondo terreno di isolamento selettivo (Vibrio Chromogenic Agar).
6. Incubare a 37 ± 1 °C per 24 ± 3 ore.
7. Conferma.

• Isabel Mª García Bermejo. Diagnóstico de las infecciones humanas causadas por especies halófilas del género Vibrio. Servicio de Microbiología, Hospital de Getafe.
• Koneman. Diagnostico Microbiológico/Microbiological diagnosis: Texto Y Atlas En Color. Stephen Allen Ed. Médica Panamericana, 30/06/2008.
• Romero Cabello, Raúl. Rodríguez, E; Gamboa, M; Hernández, F; García, J. 2005. Microbiología y Parasitología Humana. Bases etiológicas de las enfermedades infecciosas y parasitarias. 3ª Edición. Médica Panamericana.
• H.Y. Kudo et al. Improved Method for Detection of Vibrio parahaemolyticus in Seafood. ASM. Vol 67, No. 12, pg 5819-5823 (2001).
• Technical Specification ISO/TS 21872-1:2007(E) Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the detection of potentially enteropathogenic Vibrio spp. Part 1: Detection of Vibrio parahaemolyticus and Vibrio cholerae.
• Technical Specification ISO/TS 21872-2:2007(E) Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the detection of potentially enteropathogenic Vibrio spp. Part 2: Detection of species other than Vibrio parahaemolyticus and Vibrio cholerae.