AIM -Super Growth w/o Trace Element

Il principio degli AIM si basa su fonti di carbonio del terreno che vengono metabolizzate in modo differenziato, per favorire la crescita cellulare ad alta densità e indurre automaticamente l'espressione delle proteine dai promotori lac. Gli AIM contengono come fonte di carbonio sia il glucosio sia il lattosio. Una concentrazione limitata di glucosio viene metabolizzata preferenzialmente durante la crescita, e questo impedisce l'assorbimento del lattosio finché il glucosio non si esaurisce, di solito tra la metà e la fine della fase logaritmica. Quando il glucosio si esaurisce, il lattosio può essere assorbito e convertito dall'enzima beta-galattosidasi nell'induttore allolattosio. L'allolattosio provoca il distacco del repressore lac dai suoi siti di legame specifici nel DNA e induce così l'espressione della T7 RNA polimerasi dal promotore lacUV5 e sblocca i promotori T7lac, permettendo l'espressione delle proteine bersaglio da parte della T7 RNA polimerasi. Con i terreni AIM, la crescita cellulare ad alta densità è seguita da un'induzione spontanea dell'espressione delle proteine. Non è necessario controllare la densità cellulare e non c'è l'induzione convenzionale con IPTG.

Il principio dei terreni AIM si basa su fonti di carbonio del terreno che vengono metabolizzate in modo differenziato, per favorire la crescita cellulare ad alta densità e indurre automaticamente l'espressione delle proteine dai promotori lac. La crescita in parallelo di molte colture non indotte o autoindotte è possibile perché le colture vengono semplicemente inoculate e fatte crescere fino a saturazione. È un grande vantaggio pratico e semplifica l'induzione e l'analisi, manuali o automatizzate, di più cloni rispetto all'induzione convenzionale con IPTG, che richiede di controllare la crescita di ogni coltura e di aggiungere l'induttore nella fase di crescita giusta. Per una densità di saturazione più alta di quella di AIM-LB Broth (LC-2094).

Preparazione

Sospendere 74,85 grammi di terreno in un litro di acqua distillata. Mescolare bene e sciogliere scaldando e agitando spesso. Far bollire per 1 minuto o fino a completa dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 115 °C per 20 minuti. Mescolare bene e distribuire come desiderato.

Istruzioni per l'uso

Inoculare e incubare a una temperatura di 35 ± 2 °C e osservare dopo 18-48 ore.

• Studier, F. W. 2005. Protein production by auto-induction in high-density shaking cultures. Protein expression and purification 41: 207-234.